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乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球主要的公共健康问题，超过20亿人感染HBV，有3.5-4亿人为慢性感染，每年50-100万人死于乙肝相关性终末期肝病。我国属于HBV高流行区，HBsAg检出率为10%，有9,300万慢性HBV感染者，每年约35万人死于乙肝相关性肝硬化和肝细胞癌。目前针对HBV感染的防治，主要依赖于婴儿期乙肝疫苗的预防接种和感染者抑制病毒复制。然而，阻止HBV入侵肝细胞和诱导肝细胞增殖则是更有效的治疗方案。迄今为止，HBV入侵肝细胞的分子机制仍不能明确。目前，普遍认为HBV入侵肝细胞是由病毒包膜蛋白HBsAg调节的。HBsAg蛋白包括大、中、小三种形式，其中，表面抗原大蛋白(LHBs)由前S1、前S2和S区编码蛋白组成，中蛋白(MHBs)由前S2和S区编码蛋白组成，小蛋白(SHBs)由S区编码蛋白组成。大蛋白前S1区被认为是HBV入侵肝细胞的关键部位，可以与HBV受体结合。近年来，已发现很多HBV结合伴侣，可能是HBV入侵肝细胞途径中的相关蛋白或者在肝细胞膜上的受体，主要有：β2糖蛋白I(beta2-GPI)、膜联蛋白V、膜联蛋白II (annexin II, ANX2)、去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、糖胺聚糖(GAG)、鳞状细胞癌抗原(SCCA)、羟肽酶D等等。最近研究认为，钠离子牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)是人类乙型和丁型肝炎病毒的功能性受体。HBV的宿主特异性和嗜肝性与肝细胞表面特异性受体有关，深入探索HBV究竟通过哪种途径如何入侵肝细胞至关重要。β2糖蛋白I是血浆中含量丰富的糖蛋白之一，主要由肝细胞合成，与HBsAg具有高亲和结合的特性。近年来，关于beta2-GPI的研究主要集中于作为自身抗原或共因子，参与抗磷脂综合征等自身免疫性疾病血栓事件的发生。但有趣的是，beta2-GPI是个易变的分子，它的构象和功能随着与其结合的分子或者复合物的变化而改变。Beta2-GPI有五个功能区组成，类似于补体调控蛋白，第五功能区结构特殊，带有高度正电荷区。电子显微镜观察显示，健康人血浆中beta2-GPI以非致病的环状形式存在，即第一功能区和第五功能区结合。当阴离子结构与第五功能区结合，beta2-GPI由闭合的环状开放呈“S”型，以利于与其他分子结合，表现多样的生物学活性。已有研究发现，HBsAg与beta2-GPI第五功能区结合，beta2-GPI的糖基不能改变其与HBsAg的亲和能力，在HBV病毒复制活跃期，HBsAg与beta2-GPI结合能力增强，还鉴定出beta2-GPI与肝癌细胞SMMC-7721细胞膜上annexin II特异性结合。我们推测：以beta2-GPI为中介，通过HBV-beta2-GPI-ANX2路径入侵肝细胞，成为乙肝病毒亲嗜肝细胞的可能途径之一。本研究首先以L02、SMMC-7721、HepG2、HepG2.2.15、293T、CHO细胞为研究对象，采用western blot方法检测不同细胞中beta2-GPI的表达，其中：肝癌细胞SMMC-7721用于前期实验；HepG2.2.15由HepG2衍生而来，为HBVDNA转染HepG2的稳转细胞系，能持续、稳定表达HBV成熟病毒颗粒和HBsAg、HBeAg；L02为永化化胎儿正常肝脏细胞，作为正常对照；人胚肾细胞HEK-293T和中国仓鼠卵巢癌细胞CHO-K1具有较高转染效率，293T细胞还多用于病毒包装的研究。结果表明，HepG2.2.15细胞中beta2-GPI表达明显高于L02、SMMC-7721和HepG2细胞，而293T和CHO细胞中表达很少。通过qRT-PCR方法检测同源细胞系HepG2和HepG2.2.15中beta2-GPI mRNA水平，发现HepG2.2.15细胞中beta2-GPI mRNA水平也明显升高。接下来，选取L02、HepG2、HepG2.2.15和293T细胞为研究对象，将不同浓度梯度HBsAg或（和）beta2-GPI蛋白(0-800ng mL-1)与细胞共孵育，ELISA检测发现beta2-GPI能增强HBsAg与不同细胞表面的结合，尤其是与L02和293T细胞，但无beta2-GPI浓度依赖性。已知beta2-GPI能与细胞膜上annexin II结合，我们认为HBsAg与不同细胞表面结合能力的差异也可能与annexin II有关。进一步通过westernblot法检测不同细胞中annexin II的表达，发现HepG2.2.15细胞中annexin II含量明显低于L02、SMMC-7721、HepG2和293T细胞，CHO细胞中有少量表达。进一步研究HBV和HBsAg与beta2-GPI的相互作用，将HBV和HBsAg表达载体分别与beta2-GPI质粒共转染293T细胞，发现HBV和LHBsAg直接增强beta2-GPI表达，MHBsAg和SHBsAg对beta2-GPI表达无影响，还发现beta2-GPI能抑制HBsAg分泌。此外，将HBV表达载体转染HepG2细胞中，HBV能降低annexin II表达。采用细胞免疫标记技术，通过共聚焦显微镜观察发现，HepG2.2.15细胞中beta2-GPI分别与HBsAg和annexin II共定位于细胞质，annexin II与HBsAg也共定位于细胞质；HepG2细胞中，beta2-GPI和NTCP共定位于细胞膜，beta2-GPI和annexin II共定位于细胞质中。综上研究，HBV使beta2-GPI表达上调，高表达beta2-GPI促进HBsAg与细胞表面结合，有利于病毒与NTCP受体结合，beta2-GPI与annexin II结合可能促进病毒与细胞表面结合和膜融合的发生。此结论为深入探索HBV入侵肝细胞的分子机制开辟了新思路和新方向。