【摘 要】
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水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streakeddwaf virus,RBSDV),是呼肠孤病毒科斐济病毒属成员,可引起水稻黑条矮缩病、玉米粗缩病等,对东南亚地区的水稻、玉米等作物造成了严重危
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水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streakeddwaf virus,RBSDV),是呼肠孤病毒科斐济病毒属成员,可引起水稻黑条矮缩病、玉米粗缩病等,对东南亚地区的水稻、玉米等作物造成了严重危害。目前国内外主要是依靠一些分子生物学方法(如RT-PCR和核酸杂交)检测RBSDV,但在实际生产中这些方法的应用受到限制。分子生物学方法的不足之处是费时以及成本较高,不适于大批量样品的检测。本研究的主要目标是发展一种较RT-PCR方法更为迅速和有效的利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RBSDV的方法。
本研究采用RT-PCR方法从感染RBSDV的水稻中克隆该病毒的外壳蛋白基因(Coat Protein,CP),CP基因再亚克隆到原核表达载体PET-32a中构建成重组原核表达载体pET32a-CP。将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,Ni2+-NTA树脂亲和柱纯化获得蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子制备RBSDV外壳蛋白的多克隆抗体,并用制备的多克隆抗体建立了检测RBSDV的免疫捕获RT-PCR及Dot-blot ELISA等方法,能够快速检测田间玉米和水稻作物是否感染RBSDV病毒。
以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/C小鼠,用杂交瘤细胞技术制备了1株能够稳定传代并分泌抗RBSDV外壳蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株5G1。该单抗腹水对RBSDV病叶的ACP-ELISA检测灵敏度为1;1280。
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