块菌及其发酵体系中多糖的分离纯化、生物活性及结构研究

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丰富的营养和优越的保健功能是天然块菌作为一种稀有食药用真菌的主要特征。采用液体深层发酵技术所得到的发酵块菌能否作为这一天然珍稀食用菌块菌的一种替代资源,对其主要营养和生物活性成分——多糖进行生理生化评价是一项必须进行的重要工作。为此,本论文首次对块菌及其发酵体系中的多糖进行了系统的提纯,考察了所得多糖的抗肿瘤和抗糖尿病生物活性,表征并分析了不同来源、不同提纯方法及部分生物活性较好的多糖的结构。采用常用的热水浸提、碱浸提、酸浸提结合Sevag去蛋白的方法的从补料分批黒孢块菌发酵体系中分离到4个多糖组分。为了解决野生块菌色素严重的问题,建立了可以同时去除色素和蛋白,并对粗多糖进行分级的活性炭柱分离法,采用该方法从三种野生块菌及四种发酵块菌中分离到60个多糖组分。考察了野生块菌和块菌发酵体系多糖对五种肿瘤细胞增殖和对两个抗糖尿药物靶点酶的抑制作用。结果显示野生块菌和发酵块菌多糖具有明显的抗肿瘤活性和一定程度的PTP1B酶活抑制作用,其中对肝癌细胞增殖的抑制作用最为明显,达到了70 %的抑制率。并发现同种分离方法所得的发酵块菌多糖的抗肝癌活性强于野生块菌多糖;采用活性炭柱分离法所得的块菌多糖的抗肝癌活性要强于传统方法所得块菌多糖。对块菌子实体和发酵体系中的分离得到的部分多糖的结构进行了分析。运用红外色谱(IR)、气相色谱(GC)、液态核磁共振波谱(NMR)、凝胶渗透色谱-蒸发光散射检测器(GPC-ELSD)联用及凝胶渗透色谱-激光光散射-示差折光率检测器(GPC-MALLS-RI)联用的多糖结构分析方法,得到黒孢块菌发酵体系中四个多糖的初级结构。其中,多糖F-T. m-MPS-a由β-(1-4)-D葡聚糖、甘露糖和半乳糖所组成,重均分子量为1.50×106 g/moL;多糖F-T. m-MPS-1可能是由甘露糖和半乳糖所组成的酸性蛋白多糖,其分子量为1.42×10~4 g/moL。将上述结果与抗肿瘤活性的结果进行分析,可推测发现结合蛋白的存在和较低的分子量有利于黒孢发酵块菌多糖的抗肿瘤活性。
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