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目的:对已获人源化FGF2单克隆抗体E12进行特性分析与鉴定;研究人源化FGF2单抗E12单独及联合顺铂和紫杉醇对乳腺癌细胞株MCF-7以及MDAMB453的细胞增殖抑制及促细胞凋亡作用;并分析人源化FGF2单抗E12生物学活性的分子机制。方法:1.对已获人源化FGF2单克隆抗体E12的人源化改造情况进行统计分析,使用SDS-PAGE和HPLC对单抗纯度进行分析,并用间接ELISA对单抗的效价进行检测,使用BCA法对人源化单抗的蛋白浓度进行检测;2.通过CCLE数据库分析肿瘤细胞株MDA-MB453和MCF7的FGF2以及FGFR基因的表达量;3.MTT法检测肿瘤细胞株MDA-MB453和MCF7对FGF2的敏感性,CCK8法检测FGF2单抗单独及联合化学治疗药物顺铂与紫杉醇对乳腺癌细胞株MDAMB453以及MCF-7的细胞增殖抑制作用;4.使用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染,检测FGF2单抗单独及联合化学治疗药物顺铂与紫杉醇对乳腺癌细胞株MDA-MB453以及MCF-7的促凋亡作用;5.使用Discovery Studio软件分析抗体的表位和FGF2的生物活性位点,通过比较两者的重合区域来对FGF2单抗生物学活性的分子机制进行解释,并对抗原抗体结合界面上的氨基酸进行虚拟突变,筛选到对结合起到重要贡献的氨基酸以及可能增加抗体亲和力的氨基酸突变组合。结果:1.抗人FGF2人源化抗体E12抗体可变区人类抗体氨基酸序列来源比率为重链达到98.89%,轻链达到了100%,SDS-PAGE和HPLC的纯度鉴定表明,抗体的纯度达到99.02%,ELISA检测则表明人源化单抗效价为0.004μg/ml,BCA法检测表明人源化单抗的浓度为8.74mg/ml;2.FGF2/FGFR1基因m RNA表达量在两株细胞中均为相对平均值高表达,FGF2对两株肿瘤细胞株均具有促进生长的作用,人源化FGF2单抗在浓度为500μg/ml时,对MCF-7的抑制率为32%,对MDA-MB453的抑制率为37%。顺铂浓度分别为0.625,2.5,5,10,μg/ml时,单抗顺铂联合组比顺铂单独组对MCF-7抑制率分别提高了14.5%,10.4%,1.5%,0.5%。对MDA-MB453抑制率分别提高了15.5%,14.8%,13.0%,6.8%。紫杉醇浓度分别为1.0,0.1,0.01,μg/ml时,单抗紫杉醇联合组比紫杉醇单独组对MCF-7抑制率分别提高了14.5%,11.1%,9.3%。紫杉醇浓度分别为0.1,0.01,0.001,μg/ml时,单抗紫杉醇联合组比紫杉醇单独组对MDAMB453细胞的抑制率分别提高了18.6%,19.9%,6.8%;3.流式细胞仪检测结果表明,与空白对照组相比,使用FGF2单抗,紫杉醇单独处理以及FGF2单抗+紫杉醇的联合组处理的MCF-7细胞在Annexin V/PI双阳性区域所占比例分别提高了6.13%,7.36%,12.83%,使用FGF2单抗,顺铂单独处理以及FGF2单抗+顺铂的联合组处理的MCF-7细胞在Annexin V/PI双阳性区域所占比例分别提高了6.39%,9.46%,17.76%,使用FGF2单抗,紫杉醇单独处理以及FGF2单抗+紫杉醇的联合组处理的MDA-MB453细胞在Annexin V/PI双阳性区域所占比例分别提高了4.86%,7.1%,14.1%,使用FGF2单抗,顺铂单独处理以及FGF2单抗+顺铂的联合组处理的MDA-MB453细胞在Annexin V/PI双阳性区域所占比例分别提高了5.38%,9.06%,19.39%。4.FGF2与FGF2单抗E12可变区同源建模结构的分子对接成功预测了L:ASN28,H:VAL38等氨基酸为抗体的表位。晶体结构分析鉴定了FGF2:HIS16等氨基酸为FGF2的生物活性部位。两者比较发现具有9个氨基酸重合部位。抗原抗体结合位点氨基酸的丙氨酸扫描确定了H:GLY111Y,H:GLY113等氨基酸为抗原抗体结合的重要氨基酸,后续的饱和突变确定了L:TYR38>TYRL,ASP114>ASP等突变组合可以作为提高抗体亲和力的候选突变。