中药田基黄复方合剂是由田基黄(Hypericum japonicum Thumb)和生甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch)等几味中草药组成。本实验室前期的初步研究已经证实该复方对鸭病毒性肝炎有较好的治疗作用,为进一步开发利用该复方合剂,我们根据新兽药的安全可靠、质量可控、质量稳定等申报原则,本试验从中药田基黄复方合剂的安全性及其对干酵母致大鼠发热模型的解热作用等三个方面进行了初步研究,主要内容如下:试验Ⅰ田基黄及其复方制剂提取工艺研究本试验采用正交法(设计四因素、三水平)初步研究了以乙醇作为溶剂(热乙醇回流浸提法)来筛选提取田基黄中总黄酮的最优工艺,在510nm处紫外分光光度计测量其吸收值,从而计算总黄酮提取量。考察提取温度(分别设70℃、80℃、90℃)、提取时间(设2h、3h、4h)、乙醇浓度(设30%、40%、50%)和料液比(设1:30、1:40、1:50)四个主要因素的交叉影响,为此设计了正交试验,以确定田基黄的最佳工艺。结果在提取温度为80℃,提取时间3h,50%乙醇且料液比为1:40的情况下是田基黄最佳的提取工艺条件,总黄酮最大提取量是108.69mg/g生药。在确定了田基黄单味药的最佳提取工艺之后,将残渣与复方其余中药合煎,用水做溶剂,同样方法测定了中药田基黄复方合剂中总黄酮的含量。设料液比(1:10、1:15、1:20)、煎煮时间(40min、60min、80min)和煎煮次数(1、2、3)为影响因素。结果表明在煎煮次数为2次,煎煮时间为40min,料液比为1:20的情况下为田基黄复方的最优提取工艺,总黄酮最大提取量为42.5mg/g生药,并经验证该工艺实际可行。试验Ⅱ中药田基黄复方合剂的安全性评价急性毒性试验的预实验中,取体重约20g的ICR小鼠30只,雌雄各半,设高、低剂量给药组和空白对照组,实验前预饲养一段之间后,各组均按最大灌胃体积(0.8ml/20g)一次灌胃给药,田基黄复方给药组的2个浓度梯度分别为2g/ml和0.2g/ml(按生药量计),对照组按同途径同体积灌胃生理盐水。观察并记录灌胃后各组小鼠的运动行为、饮水、采食和粪便等生理状态,连续观察7d。结果未见小鼠出现死亡情况,故无法测出中药田基黄复方合剂的LD50,因此随后进行了最大给药量试验。取体重约20g小鼠20只,雌雄各半,设复方给药组和空白组共2组,分开饲养,预饲养一周左右时间后进行正式实验。实验前禁食不禁水过夜,给药组按小鼠最大耐受体积0.8ml/20g体重灌以2g/ml浓度的田基黄复方煎液,空白组同样方法灌以生理盐水,1日内灌胃2次,每次间隔8h,此后详细观察并记录灌胃后各组小鼠的饮水、呼吸、采食、运动和死亡等情况,连续监测7天。结果发现各组小鼠一切正常,因而计算出最大耐受量为160g/kg(折合生药量计),最大耐受倍数是鸭每日临床用药剂量(按0.2g/70g体重)的56倍。长期毒性试验取体重约200gWistar大鼠80只,根据体重随机分为4组,3个药物剂量组分别灌胃2g/ml、0.67g/ml、0.22g/ml的中药田基黄复方煎液2.4ml,空白对照组灌胃等体积的生理盐水,每天1次,连续灌以30天,并在停药后连续观察14天,每天观察各组大鼠的给药反应,分别于给药前(D0)、停药后第1(D1)、7(D7)和14d(D14)称量各组大鼠的体重,计算平均体重;在停药后D1和D14,每组分别随机抽取10只大鼠(雌雄各半),乙醚麻醉、经股动脉采血肝素抗凝后,分析其血常规各指标变化和血清生化水平的变化(各10项);同时剖检,切取动物脏器心、肝、脾、肺、肾、睾丸/卵巢和胃肠,称重后计算脏器指数;取相关脏器组织,做石蜡切片,经HE染色后,显微镜下做病理组织学观察。结果发现灌胃给药后各组大鼠未出现异常的生理状态或死亡,通过全自动血液生化分析仪测得血常规和血清生化各指标值均在正常值范围内,内脏剖检亦未见明显病变,病理组织学观察均正常。说明中药田基黄复方合剂并没有明显的长期毒性反应。试验Ⅲ中药田基黄复方合剂对干酵母致大鼠发热模型解热作用的初步研究选取体重约200g左右的Wistar大鼠作为本试验动物,试验前适应性测温并记录数据,根据大鼠的基础体温将其分成空白组、模型组和高、中、低给药组,每组各10只,雌雄各半;采用背部皮下注射法(20%干酵母混悬液,10mL/kg)给模型组与给药组大鼠造模,2h后,高、中、低三个给药组分别按2g/ml、0.67g/ml、0.22g/ml的田基黄复方煎液灌胃给药,模型组和空白组同途径给生理盐水,各组均按等容积(2.4ml/200g)灌胃;给药后6h,每组各取4只大鼠,雌雄各半,乙醚麻醉后,股动脉采血做相应血液学和血清生化指标检测;次日,同时间点再次给药后同法检测血液各水平值。试验期间每2h测肛温1次,并记录灌胃后大鼠各项临床指征如精神状态、行为、饮水、采食、呼吸、死亡及剖检病变等。结果显示造模后2h左右,模型组和给药组大鼠均开始出现体温下降、扎堆、嗜睡,随后数小时表现精神亢奋、啃咬后背、被毛蓬乱、呼吸加快、喜饮、尾根烫手、粪便干结等异常病理状态,剖检发现肝脏和肺脏出现不同程度的水肿、出血斑点等,空白组一切正常;分析血常规和生化各指标发现两次采样中空白组白细胞和各单核吞噬细胞数值较其它各组偏高,而谷草转氨酶及总胆红素水平却较低,差异显著,其它各项指标值均在正常范围内;各组肝、肾脏器指数均无显著性差异;由体温热曲线分析,在32h的监测期内,高、中剂量给药组大鼠体温逐渐下降至正常体温上下,此时模型组大鼠仍高烧不退,说明中药田基黄复方合剂有一定的解热效果。