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目的肿瘤坏死因子凋亡相关配体(TNF-related apoptosis inducingligand，TRAIL)是近年发现的肿瘤坏死因子家族的一员，在正常人体组织中广泛存在，主要参与机体的免疫自稳定、免疫监控和免疫应答的调节，但对正常组织细胞基本无毒副作用，而主要选择性作用于肿瘤细胞，促进其凋亡。鉴于有学者报道，TRAIL表达的降低可能与HBV感染的慢性化有关，我们推测，TRAIL可能在抑制乙肝病毒复制方面发挥某种作用。为此，作者采用肝癌细胞株HepG2及其同种系的HepG2.215建立体外细胞模型，就TRAIL分子对HBV复制与转录的影响及其与凋亡的关系作了初步探索，希望可以为抗乙肝病毒治疗找到新思路。方法1．研究sTRAIL对HBV DNA转录、复制和表达的影响。将具有相同遗传背景的肝癌细胞株HepG2.215和HepG2细胞作为体外模型，使2.5～20ng／ml sTRAIL分别作用于已与HBV基因组整合的HepG2.215和转染了乙肝病毒pHBV4.1的HepG2细胞，通过ELISA测定HepG2.215细胞培养上清中HBsAg、HBeAg量的变化情况(加sTRAIL 0～5天)；通过免疫组化观察HepG2细胞分泌HBsAg、HbcAz的变化情况(加sTRAIL 48h后)；用Southern核酸吸印杂交检测HepG2.215和HepG2细胞中HBV复制中间体水平，Northern核酸吸印杂交检测HepG2细胞中3.5kb、2.4kb、2.1kb和0.7kb HBV mRNA的转录水平(加sTRAIL 48h后)。2．用乙肝病毒全基因重组质粒pHBV4.1转染HepG2细胞，加入sTRAIL(10、20、100、200、1000ng／ml)作用48h后，以电泳观察DNALadder形成实验，了解不同浓度的sTRAIL诱导细胞凋亡的情况。结果1．Southern核酸吸印杂交的结果显示，与未加sTRAIL的对照组相比，10ng／ml sTRAIL作用48h后的实验组(已与HBV基因组整合的HepG2.215或转染了乙肝病毒pHBV4.1的HepG2细胞)中的HBV复制中间体rcDNA、ssDNA均下降了3～20倍；Northern核酸吸印杂交的结果显示，与未加sTRAIL的对照组相比，加了10ng／ml sTRAIL作用48h后的实验组(转染了乙肝病毒pHBV4.1的HepG2细胞)中的HBV前基因组RNA(即3.5kb RNA)的转录水平下降了5～20倍。2．ELISA检测结果显示。加入不同浓度(0、2.5、5、10、20ng／ml)sTRAIL作用于HepG2.215细胞后，对其分泌HBsAz、HBeAg量进行连续5天的观察，各浓度组检测结果进行方差分析和两两比较后提示：与不加sTRAIL组相比，在2.5、5、10、20ng／ml范围内，加入sTRAIL后，第1天起HBsAg分泌量即均显示减少(p＜0.01)；且随加入sTRAIL剂量的增加，HBsAg分泌量的减少更趋明显(p＜0.05)，显示出药效／浓度依赖性。另一方面，与不加sTRAIL组相比，在2.5、5、10、20ng／ml范围内，加入sTRAIL后，从第3天起，5、10、20ng／ml组的HBeAg分泌量均显示减少(p＜0.05)；但sTRAIL各剂量组之间两两比较，HBeAz的分泌量没有显著性差异(p＞0．05)。3．免疫组化检测结果显示。10ng／m1 sTRAIL作用于HepG2细胞48小时后，免疫组化检测观察到细胞中HBsAg、HbcAg分泌量表达明显减少。4．LADDER实验结果提示，sTRAIL诱导HepG2细胞(已转染乙肝病毒pHBV4.1)凋亡的现象呈浓度依赖性。加入sTRAIL 100ng／ml组作用48小时后，则可见LADDER条带，表明HepG2细胞已出现可检测的凋亡；加入sTRAIL 200ng／ml组作用48小时后，LADDER条带明显变强。但是，在上述可以产生HBV复制及表达抑制现象的sTRAIL浓度10、20ng／ml组作用48小时后，HepG2细胞未见明显凋亡。结论10ng／ml sTRAIL作用48小时后可使转染了pHBV4.1的HepG2细胞分泌HBsAg、HBcAg量减少，HBV复制中间体DNA和转录产物3.5kb mRNA水平降低；HepG2.215细胞HBV复制中间体DNA生成减少。而2.5～20ng／ml浓度范围内sTRAIL作用48小时后，HepG2.215细胞分泌HBsAg、HBeAg量下降；且HBsAg下降趋势呈sTRAIL浓度依赖性。另由LADDER实验的结果观察到，sTRAIL诱导HepG2细胞(已转染乙肝病毒pHBV4.1)凋亡的现象呈浓度依赖性。100ng／ml sTRAIL作用48小时后，转染了pHBV4.1的HepG2细胞方可观察到凋亡现象；小于此剂量则未见凋亡。上述结果提示，sTRAIL可能通过某种机制对HBV复制、转录及表达的过程发挥了抑制作用，在sTRAIL2.5～20ng／ml浓度范围内，该抑制作用的产生与诱导细胞凋亡似无明显关系。