酶作为工业上重要的催化剂,在各个领域都有广泛的应用。微生物是酶的重要来源,微生物发酵体系中存在多种酶组分,但由于缺乏分析发酵体系中多种酶组分的技术,工业酶制剂生产中通常只针对一种或两种酶进行分离纯化应用,没有对发酵体系中的多种酶进行充分利用。本论文以黑曲霉发酵柚皮体系作为研究对象,利用蛋白质组学技术分析其产酶组分,并对其主要酶组分进行分离和应用研究,主要结果如下:(1)以黑曲霉41034作为发酵菌株,以添加柚皮苷的察氏培养基和标准察氏培养基为对照培养基,用LTQ技术分析柚皮固态发酵产物中的蛋白质种类,共鉴定出葡萄糖苷酶、葡聚糖酶、葡糖淀粉酶和甘露糖苷酶等656个胞外蛋白,对其按功能进行分类,柚皮固态培养基中主要分泌碳水化合物相关的酶类、细胞代谢相关酶、脂质代谢相关酶、氧化还原酶,添加柚皮苷的察氏培养基主要分泌碳水化合物相关酶类、细胞代谢相关酶类和少部分氧化还原酶类,而标准察氏培养基则主要分泌细胞代谢相关酶以及碳水化合物相关酶类,主要为分子量在20-135 kDa之间的酸性蛋白。(2)用DEAE-Sepharose阴离子交换柱和HiTrap Blue HP亲和层析柱进行分离,将黑曲霉固态发酵柚皮的粗酶提取液分成4个部分,通过蛋白质组学技术鉴定主要酶组分分别为α-L-阿拉伯糖苷酶、α-L-鼠李糖苷酶、葡萄糖苷酶和半乳糖苷酶,酶活力分别为1.2,737.2,146.9,15.5 U/mL,比活力分别为4.7,5542.9,1514.3,234.4 U/mg。(3)分离得到的α-L-鼠李糖苷酶最适pH为4.0-5.0,最适温度50 ~oC,可有效分解柚子果汁和橙子果汁的柚皮苷;β-葡萄糖苷酶的最适pH为3.0,最适反应温度70 ~oC,可显著水解大豆异黄酮生成大豆苷元;α-L-阿拉伯糖苷酶最适pH为4.0,最适温度60 ~oC,其单独水解阿拉伯木聚糖酶与结合木聚糖协同水解效率差异不大;β-半乳糖苷酶的最适pH为3.0,最适温度70 ~oC,可以有效水解乳糖生成半乳糖。通过以上研究,基于蛋白组学技术建立了对黑曲霉固态发酵柚皮产生的酶组分进行分离利用的技术,为工业酶发酵体系中多酶组分的分离利用提供了技术参考。