论文部分内容阅读
目的:研究瘦素及脂联素对人乳腺癌细胞MCF-7与T47D增殖、细胞周期以及凋亡所产生的影响,探讨瘦素、脂联素在乳腺癌发生发展中的作用。方法:(1)分别采用含10%与15%胎牛血清的RPMI-1640培养基体外培养MCF-7与T47D细胞。台盼蓝染色法计数细胞后,每24h在倒置显微镜下观察T47D细胞的生长情况,连续三天。(2)采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度瘦素作用24h、48h、72h对体外培养的MCF-7与T47D细胞增殖的影响。(3)采用碘化丙啶(PI)染色,流式细胞仪检测瘦素作用48h对MCF-7与T47D细胞周期的影响,脂联素作用48h对T47D细胞周期的影响。(4)采用Annexin V-FITC与PI染色,流式细胞仪检测瘦素、脂联素作用24h对MCF-7与T47D细胞凋亡的影响。结果:(1)镜下观察,T47D细胞单层贴壁生长,呈不规则形,状态良好。细胞数量在72h内由刚传代后的(1.69±0.68)×105/ml增加到(4.25±1.32)×105/ml。(2)25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml瘦素作用24h、48h、72h,可以促进MCF-7细胞增殖,浓度与时间不存在交互作用(F=0.919,P=0.523),浓度及时间各自的主效应均有统计学意义(P均<0.01)。多重比较结果显示200ng/ml及400ng/ml瘦素组与对照组相比有统计学差异(P均<0.01)。其中400ng/ml作用72h后细胞增殖率最高(16.6%)。不同时间段多重比较均有统计学差异(P均<0.01)。(3)相同浓度瘦素作用24h、48h、72h可以促进T47D细胞增殖,浓度与时间不存在交互作用(F=0.620,P=0.787),浓度及时间各自的主效应均有统计学意义(P均<0.01)。多重比较结果显示200ng/ml及400ng/ml瘦素组与对照组相比有统计学差异(P均<0.05)。其中400ng/ml作用48h后增殖率最高(21.75%)。不同时间段多重比较也均有统计学差异(P均<0.01)。(4)100ng/ml、400ng/ml瘦素作用48h后MCF-7细胞G0/G1期比例分别为(60.26±2.26)%、(54.72±2.55)%,与对照组(63.94±0.81)%相比有统计学差异(F=10.464,P=0.044);S期比例分别为(32.24±0.94)%、(36.62±0.75)%,与对照组(29.97±0.04)%相比也有统计学差异(F=47.361,P=0.005);G2/M期变化无统计学差异(F=1.77,P=0.311)。同样浓度瘦素作用后T47D细胞G0/G1期、S期、G2/M期的变化无统计学差异(P均>0.05)。(5)500ng/ml、2000ng/ml脂联素作用48h后,T47D细胞的G0/G1期比例分别为(91.07±0.63)%、(91.60±0.98)%,与对照组(85.31±1.07)%相比有统计学差异(F=29.277,P=0.011);S期、G2/M期的变化均无统计学差异(P>0.05)。(6)100ng/ml、400ng/ml瘦素作用24h后MCF-7细胞的早期凋亡率和总凋亡率的改变均无统计学差异(P>0.05);T47D细胞的早期凋亡率分别为(1.77±0.47)%、(1.08±0.03)%,与对照组(6.54±1.27)%相比有统计学差异(F=28.213,P=0.011);总凋亡率分别为(2.13±0.74)%、(1.55±0.16)%,与对照组(7.48±1.39)%相比有统计学差异(F=25.642,P=0.013)。(7)500ng/ml、2000ng/ml脂联素作用24h后,MCF-7细胞早期凋亡率与对照组相比无统计学差异(P>0.05),总凋亡率分别为(17.20±0.31)%、(16.25±0.29)%,与对照组(12.61±0.62)%相比有统计学差异(F=62.049,P=0.004)。同样浓度脂联素作用后T47D细胞早期凋亡率与总凋亡率的变化均无统计学差异(P>0.05)。结论:(1)瘦素能够促进乳腺癌细胞MCF-7与T47D增殖。(2)瘦素可使MCF-7细胞由G0/G1期向S期推进,促进DNA合成,抑制T47D细胞凋亡。提示瘦素可能在乳腺癌发展中发挥促进作用。(3)脂联素可将T47D细胞阻滞于G0/G1期,抑制DNA合成,促进MCF-7细胞的中晚期凋亡。提示脂联素可能是乳腺癌发展的保护因素之一。