第一部分金银花水提物对过敏小鼠腹腔巨噬细胞的体外作用【目的】探讨金银花水提物对卵清蛋白(Ovalbumin OVA)介导的BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞体外作用【方法】对象:选用4～5周龄无鸡蛋喂养的BALB/c雌鼠为实验对象,经OVA肠道致敏、激发。方法:用50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、1.0625%的金银花水提物体外诱导过敏小鼠腹腔巨噬细胞24h,测定细胞吞噬中性红的能力及MTT法测定巨噬细胞代谢水平。【结果】金银花水提物浓度≥6.25%时,OVA介导的过敏小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬中性红能力及细胞代谢水平显著提高。【结论】体外实验结果显示较高浓度金银花水提物可增强巨噬细胞吞噬能力与细胞代谢水平,提示金银花水提物可激活过敏小鼠腹腔巨噬细胞。第二部分金银花水提物与益生菌治疗过敏小鼠作用比较【目的】探讨金银花水提物与双歧杆菌、乳酸杆菌治疗OVA介导的BALB/c小鼠免疫调节作用的比较【方法】对象:选用4～5周龄无鸡蛋喂养的BALB/c雌鼠,经OVA肠道致敏、激发后根据灌服不同的药物随机分为金银花水提物高(LTH 100%)、中(LTM 50%)浓度组,益生菌(PT)组,同时设置生理盐水为阴性对照(NS)组和单纯OVA肠道激发为阳性对照(Ch)组。方法:(1)瑞氏染色观察金银花水提物、益生菌对速发型变态反应小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力;(2)HE染色及甲苯胺兰染色观察金银花水提物、益生菌对OVA过敏BALB/c小鼠小肠组织形态的影响;(3)采用平板活菌计数法分析小鼠肠道双歧杆菌、乳酸杆菌的变化,PCR分子生物学技术进行细菌鉴定;(4) ELISA法检测小鼠血清OVA特异性IgE、IgG2a水平;(5) ELISA法检测小鼠小肠粘液总IgA、OVA特异性IgA含量。【结果】致敏小鼠灌服金银花水提物和益生菌后:(1)小鼠小肠绒毛上皮细胞局灶性坏死、脱落,固有层淋巴细胞、浆细胞等炎症细胞浸润现象明显改善;(2)小肠肥大细胞聚集和脱颗粒现象缓解,小肠固有层肥大细胞得以恢复;(3)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率与吞噬指数明显提高;(4)金银花与益生菌灌服致敏小鼠后,以高浓度金银花组小鼠肠道双歧杆菌增加最多,中浓度金银花组与益生菌组小鼠肠道双歧杆菌、乳酸杆菌增加无明显差别;(5)致敏小鼠血清OVA特异性IgE下降,OVA特异性IgG2a增加,致OVA特异性IgE/IgG2a比值下降,以金银花水提物作用最明显;(6)高浓度金银花灌服致敏小鼠的肠道总IgA、OVA特异性IgA水平高于益生菌组。【结论】国内首次研究比较金银花与益生菌治疗OVA介导的过敏小鼠速发型变态反应,证实金银花与益生菌均有明显改善过敏小鼠的过敏症状作用,高浓度金银花水提物治疗效果较益生菌更好。金银花水提物与益生菌灌服OVA介导的致敏小鼠10日后:(1)肠道粘膜肥大细胞脱颗粒、聚集现象明显改善,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能提高;(2)小鼠肠道双歧杆菌、乳酸杆菌增多,以高浓度金银花组小鼠小肠双歧杆菌增加为著;(3)两者均可降低过敏小鼠体内OVA特异性IgE水平,升高OVA特异性IgG2a,即SIgE/SIgG2a的比值降低,提示有调节Th2/Th1细胞平衡作用;(4)灌服金银花水提物与益生菌的致敏小鼠肠道局部SIgA含量增加,以高浓度金银花增加小鼠肠道SIgA最明显,提示金银花水提物能有效增强肠道粘膜免疫,促进有害抗原的清除,防止炎症的扩散;(5)中浓度金银花组与益生菌组小鼠肠道益生菌数量相近,但中浓度金银花水提物对小鼠血清SIgE/SIgG2a的降低、促进肠道OVA特异性IgA的分泌作用较益生菌明显,提示金银花水提物可能直接参与过敏小鼠的免疫调节,在改善致敏小鼠肠道功能、Th1/Th2失衡等方面作用优于益生菌;(6)肠道症状改善先于特异性免疫球蛋白的恢复,提示致敏小鼠体内免疫失衡的恢复需较长时间,金银花水提物与益生菌是否能完全恢复致敏小鼠免疫失衡状态以及对肠道粘膜免疫的作用机制尚需进一步研究。