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本研究从猪红斑丹毒丝菌全基因组水平着手,选择可编码金属转运相关蛋白、表面蛋白、膜蛋白、脂蛋白的阅读框进行跨膜区域分析、信号肽分析后设计51对引物。利用PCR基因克隆技术对选取蛋白进行基因克隆表达,经过PCR扩增、酶切、连接、转化后用特异性引物检测,结果显示51个基因片段成功插入pET-28a(+)载体。将构建好的重组质粒转入大肠杆菌BL21 (DE3)中进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳鉴定显示有23个蛋白成功得到表达,其中包括14个可溶性表达蛋白及9个包涵体表达蛋白。对23个蛋白进行小鼠免疫保护试验,最终显示Su-1(即surface protective antigen SpaA)与丹毒丝菌商品苗免疫组的保护率一致,均达到100%保护；同时Surface proteinA(Spa)节段表达的Su-2-2蛋白与Su-2-4蛋白以及脂蛋白Lp-2蛋白免疫组小鼠也有17%的存活率,也显示了一定的免疫保护效果。本实验室对SpaA氨基端的免疫保护区域构建重组SpaA-N蛋白并对其进行了小鼠攻毒保护试验,结果显示了Spa-N蛋白对小鼠有100%的保护率。本研究以该重组蛋白制备A1(OH)3佐剂亚单位疫苗,并进行猪的免疫攻毒试验,对免疫猪进行丹毒丝菌攻毒也显示了100%的保护性,结果表明Spa-N蛋白丹毒丝菌亚单位疫苗候选蛋白具有一定的可行性。亚单位疫苗诱导机体产生的抗体为疫苗所含抗原对应的抗体,而野毒感染产生的抗体比较复杂,因此可以建立一种评估方法用来鉴别诊断丹毒丝菌野毒感染抗体与SpaA-N免疫抗体,本研究选取10个可溶性表达且表达量高的蛋白作为候选包被抗原包被ELISA反应板检测丹毒丝菌感染猪血清,结果显示自然感染丹毒丝菌猪两周后采得血清就能与Fe-2蛋白包被ELISA抗原板产生较强的反应,且Fe-2蛋白包被ELISA抗原板与大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌等细菌制备的高免血清的特异性试验显示其有较好的特异性,最终选定对丹毒丝菌自然感染血清反应值较好的Fe-2蛋白作为鉴别诊断丹毒丝菌野毒感染抗体与SpaA-N免疫抗体的包被抗原,通过实验优化ELISA条件为：抗原包被量100ng/孔,血清稀释倍数1/100,血清作用时间、酶标二抗作用时间均为30min,底物作用时间15min。