目的研究同型半胱氨酸致大鼠内皮祖细胞(EPCs)损伤中细胞周期素A的作用及DNA甲基化调控的具体机制，以探索同型半胱氨酸致动脉粥样硬化可能的治疗靶点。方法本课题以大鼠血液中提取的内皮祖细胞为研究对象，以荧光标记的CD34和CD133抗体标记细胞，流式细胞术鉴定细胞。不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)进行干预，以Boyden小室法与贴壁法分别检测细胞的迁移能力和粘附能力；MTT法检测各组细胞的增殖活性；荧光实时定量PCR技术和Western blotting分别检测Cyclin A、DNMT1、MBD和MeCP2在不同浓度Hcy组中的表达水平；巢式降落式甲基化特异性PCR(ntMS-PCR)检测Cyclin A DNA甲基化水平；高效液相色谱法(HPLC)检测细胞中SAM和SAH的含量。为了确定Cyclin A在Hcy致EPCs损伤中的作用，分别构建Cyclin A的过表达载体和RNA沉默载体，检测Hcy对EPCs增殖活性的影响；同时为了确定DNMT1在甲基化调控中的角色，以RNA干扰技术沉默DNMT1的表达后，检测Cyclin A DNA甲基化的改变。结果流式细胞检测结果显示：CD133的阳性率为：(20.40±6.92)%；CD34的阳性率为：(49.17±12.47)%。MTT结果显示：Hcy可以明显抑制细胞的生长，以500mol/L浓度组最为明显，差异有显著性(P<0.05)。不同浓度Hcy干预后，细胞的粘附能力明显降低，其中500mol/L组与对照组比较下降了52%。迁移活性检测结果发现，随着Hcy浓度的增加，细胞的迁移活性随之下降，拮抗剂组迁移活性升高，EPCs的迁移活性分别为(17.23±4.54)%，(11.93%±2.68)%，(9.67±2.08)%，(8.53±1.31)%，(6.1±2.15)%和(11.57±2.38)%。荧光实时定量PCR结果显示，各Hcy组中Cyclin A mRNA表达水平随Hcy浓度的增加而减少。与正常对照组比较，500μmol/L Hcy组中Cyclin A mRNA表达水平下降了55.2%，差异有显著性(P<0.05)。Cyclin A蛋白表达与其mRNA表达水平相一致。同时利用Cyclin A基因重组和RNA干扰技术确定了CyclinA是关键基因。ntMS-PCR检测结果显示，随着Hcy浓度的增加，Cyclin A甲基化程度逐渐降低。500mol/L Hcy组中Cyclin A甲基化水平与正常对照组比较降低了约15.4%(P<0.05)；与500mol/L相比，拮抗剂组中甲基化水平则升高了8.2%。HPLC法检测SAM和SAH浓度结果显示，不同浓度Hcy作用72h后，与正常对照组相比，各Hcy组中SAM和SAH的浓度均下降(P<0.05, P<0.01)；同时500mol/L组中SAM/SAH的比值与正常对照组比较下降了49.9%(P<0.05)；与500mol/L组比较，拮抗剂组和AZC组中SAM/SAH的比值分别升高了1.51倍和1.89倍，差异有显著性(P<0.05, P<0.01)。 MBD mRNA和蛋白的表达随着Hcy浓度的升高而下降，MeCP2的表达则呈上升趋势。Hcy可以很大程度上抑制DNMT1的表达，与正常对照组相比，100mol/L，200mol/L，500mol/L，拮抗剂组及AZC组中DNMT1mRNA表达量分别下降了45.6%，61.8%，65.5%，51.8%和63.2%，差异具有显著性(P<0.05, P<0.01)。DNMT1RNA干扰后结果显示，与正常组相比，500mol/L Hcy+干扰片段组中Cyclin A甲基化水平下降了61.7%，差异具有显著性(P<0.05)。结论在Hcy导致EPCs的增殖和功能损伤中，可能是由于关键靶基因CyclinA DNA低甲基化，进而抑制了Cyclin A的表达。在甲基化调控中SAM， SAH，MBD， MeCP2和DNMT1起着重要的作用，其中DNMT1是Hcy致EPCs Cyclin A低甲基化的关键调控靶点。