家蚕(Bombyx mori)是重要的经济昆虫，已有5700多年的饲养历史。家蚕对农药的抵抗能力较弱，每年由于大田作物治虫、桑叶的农药残留造成的大量的家蚕农药中毒，使蚕业生产遭受了巨大损失。家蚕中肠是食物消化，营养物质吸收的主要器官，同时也是抵御外来物质的一道天然屏障。作为中肠防御体系的围食膜具有保护中肠上皮细胞、阻止有害物质侵入和帮助消化等多种功能。　　为了研究农药胁迫下家蚕中肠代谢抗性及损伤机制，本文以家蚕“大造”和“菁松×皓月”为材料，利用基因芯片和高通量测序技术，研究了家蚕在添食辛硫磷农药后其中肠基因的转录特征，并通过构建家蚕中肠cDNA表达文库初步筛选了围食膜蛋白，主要研究结果如下：　　1.利用基因芯片技术分析家蚕中肠经辛硫磷诱导后的转录特征　　采用基因芯片技术，研究了经辛硫磷（4.0μg/mL）诱导24h后家蚕中肠差异表达基因，对差异表达基因的功能注释、分类及涉及的KEGG信号通路进行分析。结果显示，经辛硫磷诱导后中肠中有266个基因显著差异表达，其中上调192个，上调最高达14.88倍，下调74个，下调最低是23.36倍。对部分差异表达基因进行分类，筛选出涉及解毒、免疫应答、应激反应、能量代谢、转运的相关基因。采用qRT-PCR技术对参与代谢解毒、免疫应答、应激反应、能量代谢和转运相关的11个基因进行了表达水平的验证，其中10个基因的表达趋势和芯片数据一致。　　2.利用高通量测序技术分析家蚕中肠经辛硫磷诱导后的转录特征　　采用高通量测序技术，研究经辛硫磷（4.0μg/mL）诱导24h后家蚕中肠基因表达变化，从解毒、凋亡和免疫防御三个方面分析辛硫磷诱导后对家蚕中肠组织的影响。结果显示，添毒后家蚕中肠差异表达基因共254个，其中上调基因148个，下调基因106个。解毒酶系中细胞色素P450在解毒过程中可能发挥重要的作用。通过病理学切片及透射电镜发现，辛硫磷农药诱导以后，家蚕中肠发生凋亡反应。采用Western-blotting实验验证了细胞色素C从凋亡细胞线粒体中释放到了细胞质中。QRT-PCR结果表明Toll、IMD信号通路均被抑制。　　3.家蚕中肠cDNA表达文库的免疫学筛选　　本研究成功构建了家蚕中肠组织的cDNA表达文库，初始文库容量为6.92×106pfu/ml，文库重组率为92.14%，扩增后文库滴度达到4.10×109pfu/ml，表明已成功构建高质量的家蚕中肠cDNA表达文库。根据免疫学筛选方法，用制备的家蚕围食膜蛋白多克隆抗体，对家蚕中肠cDNA表达文库进行免疫筛选，获得18个阳性克隆，并对其中3个目标基因进行生物信息学分析。　　本研究为阐明昆虫中肠代谢农药的作用机制，以及开发高效杀虫剂奠定了基础。对于阐明辛硫磷农药对家蚕中肠的损伤机制和围食膜防御功能也具有重要的参考价值。