【摘 要】
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目的:基于液质联用技术分析薄蒴草中的抗炎活性成分,对薄蒴草中的主要活性成分运用网络药理学及分子对接技术进行筛选,明确薄蒴草的药效物质基础。方法:1、通过研究薄蒴草不同极性部位对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的影响,筛选薄蒴草抗炎活性部位。2、通过高效液相色谱-质谱联用技术（high performa
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目的:基于液质联用技术分析薄蒴草中的抗炎活性成分,对薄蒴草中的主要活性成分运用网络药理学及分子对接技术进行筛选,明确薄蒴草的药效物质基础。方法:1、通过研究薄蒴草不同极性部位对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的影响,筛选薄蒴草抗炎活性部位。2、通过高效液相色谱-质谱联用技术（high performance liquid chromatographymass spectrometry,HPLC-MS）分析薄蒴草抗炎活性部位的化学成分。3、采用网络药理学及分子对接技术筛选薄蒴草主要抗炎活性成分。4、采用溶剂提取法、有机溶剂萃取法得到薄蒴草不同极性部位,并利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等技术方法对其进行分离纯化,运用质谱及核磁共振等技术方法对分离取得的主要单体化合物分别进行鉴定。5、采用LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型对分离得到的单体化合物进行抗炎活性评价,进一步验证薄蒴草中的主要活性成分。结果:1、薄蒴草不同极性萃取部位在不同的试验浓度下,NO、TNF-α、IL-6的释放均受到不同程度地抑制。乙酸乙酯部位组明确强于其他各组,且随着浓度的增加NO、TNF-α、IL-6生成量总体呈下降的趋势,表明在试验浓度下,乙酸乙酯部位对LPS诱导RAW 264.7细胞炎症状态具有缓解作用,呈一定的剂量依赖性。2、薄蒴草乙酸乙酯部位经HPLC-ESI-MS/MS分析,根据各色谱峰的分子离子峰及主要碎片峰的解析,以及与相关文献对比,指认了其中8个黄酮类成分牡荆素、芦丁、山奈酚、鼠李秦素、槲皮素、芹菜素、芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-木糖苷、槲皮苷和3个香豆素类成分伞形花内酯、7-甲氧基香豆素、5,7-二羟基香豆素。3、利用Swiss ADME平台预测薄蒴草的靶点,共取得399个潜在靶标。在Onco DB.HCC数据库收集已经实验验证的肺炎相关基因,共取得1309个相关基因。对薄蒴草作用靶点和肺炎相关基因靶点作映射比较,筛选出抗炎的可能潜在靶基因399个,核心靶点包括AKT1、GAPDH和PPARG等8个靶点。其作用机制可能与脂质与动脉粥样硬化（lipid and atherosclerosis）、癌症通路（pathways in cancer）、冠状病毒-新冠肺炎（coronavirus disease-COVID-19）等通路有关。分子对接结果显示薄蒴草目标成分可以与肺炎关键靶点以氢键的方式较好地结合,即目标具有潜在的抗炎活性。薄蒴草同一活性成分对应多个作用靶点和薄蒴草的多个活性成分对应同一靶点的“一对多”和“多对一”作用关系,体现了薄蒴草多成分、多靶点治疗肺炎的作用特点。4、经过溶剂提取法得到薄蒴草乙醇提取物,按有机溶剂极性大小对其依次进行萃取,分别得到石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、萃后水液。运用硅胶柱色谱等技术方法,对薄蒴草乙酸乙酯萃取物进行有针对性地分离纯化,利用质谱及核磁共振等技术方法对分离获得的6个单体化合物分别进行鉴定,确定它们为:7-甲氧基香豆素（1）、5,7-二羟基香豆素（2）、芹菜素（3）、山奈酚（4）、槲皮素（5）、芦丁（6）,6个化合物均为首次从薄蒴草属薄蒴草中分离得到。5、通过研究薄蒴草中分离得到的6个单体化合物对LPS诱导的RAW 264.7细胞产生NO、TNF-α、IL-6的影响,发现单体化合物有一定的的抗炎活性。结论:本研究采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等多种技术方法对薄蒴草乙酸乙酯萃取物进行分离纯化,运用质谱及核磁共振等技术方法对分离获得的化合物单体分别进行鉴定,首次辨识出薄蒴草中抗炎的主要活性成分,为薄蒴草药效物质基础及相关药品、食品开发研究提供了一定的科学依据。
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