论文部分内容阅读
海洋污损每年都给全世界带来巨大的经济损失。寻求防污效果好且不产生可污染海洋的毒素的环境友好型防污漆是现在亟需解决的问题。本实验室试图找到阻遏海洋生物形成早期过程的分子阻遏剂并与有关防污漆综合起来使用的想法，而可以将这一设想变为现实的前提就是要研究污损早期微生物群落结构的动态变化过程。本文首先详述了挂板实验，依据该实验的结果重新悬挂了八组钢板以获取实验样本。经试剂盒提取浸入海水中不同天数的钢板上的微生物全基因组，进行16SrDNA分子的克隆，双酶切检测重组子，合格的质粒送去公司测序。基于测序结果，首先初步鉴定出随着天数的增加附着在钢板上的微生物种类及其初步的动态变换过程；然后设计并筛选物种特异性引物，利用实时定量PCR技术跟踪不同天数的钢板上的基因组样本，确定附着在钢板上的微生物种类及相对数量，完成对污损早期微生物群落的动态变化的初步研究。本文得到的结论如下：（1）经过一年多的观察实验，选定本研究的样本取样时间为挂板后的二十天以内；对比小石岛、威海港及养殖场三处地点及小石岛海域1.3m、1.6m、1.9m三个深度的钢板上微生物附着情况，最终确定了小石岛海域、1.3m深度更适合采集前15天附着在钢板上的微生物的样本。（2）通过16s rDNA序列分析法，初步得到威海小石岛海域污损早期微生物24种。从污损微生物的种类上看，从浸入海中1天的钢板上检测出8种微生物，从浸入海中15天的钢板上检测出15种微生物。随着时间的增加，钢板上附着的微生物的种类呈现上升的趋势；从微生物出现的先后顺序及出现频率上看，初步显示出微生物群落的动态变化。（3）本课题筛选出的6对物种特异性引物，分别对Pseudoalteromonastetraodonis strain、Pseudoalteromonas atlantica strain、Pseudoalteromonas marinastrain、Pseudoalteromonas issachenkonii strain、Marinomonas pontica strain、Psychrobacter marincola strain这六种微生物有较好的特异性。借助Ct值分析出每种菌在1d-15d附着在钢板上的数量变化可知，随着时间的延长，这6种微生物的起始模板拷贝数均以不同的程度增加。