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目的：在本实验中，我们将证明被业界公认的Oct4和miR-302之间是存在着密切的关系和miR-302的表达和转录激活需要Oct4因子的作用。
方法：细胞培养：293T细胞在DMEM培养基中培养，添加10％的胎牛血清；载体构建：PGL3-P-miR302通过PCR克隆扩增我们假定的miR-302启动子含600个碱基对的区域，PCR引物序列如下：PGL3-miR302 promoter，forward51-CCCGGTACCCCTGGAGAAAAAGTAAGAGAC-3PGL3-miR302 promoter，reverse5-CCCAGATCTCAGACATAAGCTTTACCTCC-3。突变Oct4结合在启动子区域的部位，PCR重叠操作用两个添加引物PGL3-miR302-mut-F：5-TTTATTTATTTGTTTA CATTTAAC-3pGL3-miR302-mut-R：5-GTTAAATGTAAACAAATAAATAAA-3CR克隆产物应用PGL3-增强子产生PGL3-P-miR302-mut.OCT4的表达结构(PCMV6-AC-GFP-Oct4)来源于奥利博卡病毒基因；细胞转染和荧光素酶报告分析：我们将PGL3-P-miR302(0.5μg)和PGL3-P-miR302-mut(0.5μg)同时OCT4表达的质粒共转染进293T细胞中用量分别为0.5μg or1.0μg，并且pGL3-enhancer被选择作为对照组。转染24小时后细胞被种在12孔板上，并根据厂商的指导应用脂质体2000转染试剂。48d、时后，收获细胞并在1X的细胞裂解缓冲液进行裂解。荧光素酶的活性分析由厂商指导应用二元荧光素酶分析系统。荧光素酶活性标准化对照转染。每一个转染副本进行荧光素酶测定都至少重复两次。
结果：Oct4调节miR-302簇启动子的活性，为了确定Oct4是否能够直接增强miR-302簇启动子的活性，我们在PGL3-增强质粒中克隆了600单位的mir-302簇启动子片段来检测序列。我们将PGL3-P-miR302质粒转染到293T细胞中，并控制Oct4维持高表达的状态。PGL3-miR-302启动子活性在Oct4不高表达的情况下是没有任何改变的；可是在293T细胞中当Oct4高表达(0.5 g，1.0g)时，pGL3-miR-302启动子活性分别增加了得到不同程度的增强。
利用定点突变技术，将PGL3-P-miR302-mut质粒和表达Oct4的质粒共转染到293T细胞中；再利用双荧光素酶分析系统测定PGL3-P-miR302-mut的活性明显低于PGL3-P-miR302的活性。我们可以证明Oct4结合在miR-302启动子的位置并调节miR-302的活性表达。
结论：1.Oct4作用于miR-302簇启动因子的部位；2.Oct4呈剂量依赖的方式调节miR-302簇启动子的活性。