复方丹参对大鼠急性脊髓损伤后NF-κB因子活性的影响

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背景:在大多数国家,脊髓损伤(spinal cord injury SCI)的年发生率为每百万20-40人,虽然预防措施已经启动,但这一指数并未有减少的迹象。大部分的脊髓外伤是交通事故(45.4%),少部分是高处坠落(16.8%)和运动损伤(16.3%)引起。急性脊髓损伤经常造成损伤水平面以下运动和感觉功能障碍,临床治疗的效果也不甚理想。脊髓损伤往往导致患者终生残疾,造成社会和家庭的巨大痛苦及沉重负担。脊髓损伤后由原发性损伤引发的继发性损伤,其所造成的损伤范围几倍于原发性损伤。因此,如何减轻脊髓继发性损伤是国际上多年来重点研究的课题。炎症反应在继发性脊髓损伤中扮演着重要的角色。其中核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)是一种重要的转录因子,广泛存在于真核细胞中,参与多种基因的表达调控,具有广泛的生物活性,能够促进多种细胞因子、黏附因子和趋化因子的基因转录,在炎症反应中起重要作用。最新发现表明,NF-κB可能是参与脊髓继发性损伤的主要调控因子之一。中药复方丹参有促进大鼠脊髓损伤后功能恢复的作用。临床也有用复方丹参治疗脊髓损伤的报道,但在脊髓损伤后复方丹参对NF-κB因子的影响尚不清楚。目的:通过观察和分析复方丹参对大鼠急性脊髓损伤后NF-κB因子活性的影响,探讨复方丹参治疗促进大鼠急性脊髓损伤功能恢复的作用和分子机理,为复方丹参治疗脊髓损伤提供理论和实验依据。材料和方法:2月龄Wistar大鼠36只,体重200~250g,雌雄不限,随机分为3组:正常对照组即假手术组(腹腔注射生理盐水,不损伤脊髓);B型损伤对照组(腹腔注射生理盐水,损伤脊髓);A型复方丹参治疗组(腹腔注射复方丹参,损伤脊髓)。实验Wistar大鼠用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,取背部正中切口切除T11-T12椎板,逐层分离暴露脊髓,按Allen’s改良撞击法即重10g的铁锤从25mm高处自由落下,撞击硬膜囊,撞击能量为25mm×10g,损伤直径为2.5mm,造成脊髓中度损伤模型。术后腹腔注射复方丹参注射液,对照组在术后注射等量生理盐水等治疗。最后分别于不同时间点:术后12h、1d、3d、5d取损伤部位的脊髓组织,采用HE染色、免疫组化、免疫蛋白印迹方法检测脊髓组织中的NF-κB因子的表达。结果:HE染色显示3天后复方丹参治疗组的病理变化较生理盐水组轻,免疫组化显示NF-κB阳性细胞主要见于神经元细胞浆及细胞核内等。B型损伤对照组大鼠脊髓损伤后上述细胞NF-κB表达增加,2d~3d达高峰水平,以后逐渐降低至正常水平;A型复方丹参治疗组大鼠脊髓NF-κB表达较B组低,高峰亦发生在损伤后2d~3d。A、B两组间比较在12小时后没有差别,24小时后对照组与治疗有差别(p<0.05),72小时以后两组才有显著性差异(p<0.01)。免疫蛋白印迹方法检测显示B型损伤对照组大鼠脊髓损伤后脊髓组织中NF-κB表达明显增强,2-3d达高峰水平,以后逐渐降低;A型复方丹参治疗组大鼠脊髓组织中NF-κB表达在12小时与B型损伤对照组比较没有明显差别,于损伤后24h达到高峰水平,但其表达水平较B组弱,并随时间延长而逐渐减弱。结论:急性创伤性脊髓损伤时,复方丹参可以抑制NF-κB的活性表达,对于抑制急性脊髓损伤后的继发性损害,减轻NF-κB介导的炎性反应起到有益作用,对脊髓损伤有一定的保护作用。
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