【摘 要】
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光甘草定（疏水性黄酮）和甘草酸（三萜皂苷）为光果甘草（Glycyrrhizaglabra L.）中两种主要成分,具有抗炎、抗氧化、抗癌和免疫调节等多重药理活性,广泛应用于食品、药品和化妆品等行业。目前,国内光甘草定和甘草酸的生产仍处于原料初级加工阶段,深加工工艺主要以甘草酸的生产加工为主,而高附加值的光甘草定随药渣弃去,造成了光果甘草资源的极大浪费。而且,在工业化生产光果甘草活性成分时,提取过程普
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光甘草定（疏水性黄酮）和甘草酸（三萜皂苷）为光果甘草（Glycyrrhizaglabra L.）中两种主要成分,具有抗炎、抗氧化、抗癌和免疫调节等多重药理活性,广泛应用于食品、药品和化妆品等行业。目前,国内光甘草定和甘草酸的生产仍处于原料初级加工阶段,深加工工艺主要以甘草酸的生产加工为主,而高附加值的光甘草定随药渣弃去,造成了光果甘草资源的极大浪费。而且,在工业化生产光果甘草活性成分时,提取过程普遍采用回流提取法,其提取时间长、效率低、耗能高、资源浪费严重。另外,乙腈和甲醇等有毒试剂常做为光甘草定和甘草酸HPLC分析的流动相。因此,本研究旨在建立一种光甘草定和甘草酸绿色分析方法的基础上,对光果甘草中光甘草定和甘草酸的提取分离工艺进行研究,以期寻求一种高效节能环保的光甘草定和甘草酸工业化生产工艺。主要研究内容与结果如下:（1）光甘草定和甘草酸的HPLC-DAD绿色分析方法的建立。本实验以乙醇（A）和0.1%三氟乙酸（B）为流动相,流速0.8mL/min,检测波长为230nm,柱温40 ℃,进行梯度洗脱,洗脱程序为0-3 min,A:B=55:45;15 min,A:B=70:30;17min,A:B=55:45;20min,停止。通过方法学考察可知建立的HPLC-DAD分析方法准确可靠,且在20 min内可以完成检测。（2）超声提取法与超声微波协同提取法被认为较传统提取方法是更有效的提取技术。本实验采用响应面法分别优化了超声提取法和超声微波协同提取法提取光甘草定和甘草酸的工艺。超声提取光甘草定和甘草酸的最佳条件为:乙醇浓度64%,液固比22mL/g,超声温度51℃,超声时间31 min,在此条件下,光甘草定和甘草酸的提取率分别为93.34±0.03%和95.12±0.11%;超声微波协同提取光甘草定与甘草酸的最佳提取条件为:乙醇浓度60%,超声时间71 s,液固比21 mL/g,在此条件下,光甘草定和甘草酸的提取率分别为94.79±0.11%和96.16±0.02%。超声提取法和超声微波提取法所得光甘草定与甘草酸提取率显著高于浸提法（76.42 ± 0.09%和 81.07±0.004%）与回流提取法（83.35±0.01%和 84.29±0.001%）。（3）大孔吸附树脂分离光甘草定的工艺为:上样液浓度为0.8045 mg/mL,流速为3 BV/h,上样量为14 BV,之后用40%乙醇进行清洗,80%乙醇洗脱,洗脱流速为3 BV/h,洗脱体积为9 BV,在此条件下,光甘草定的纯度被提高到17.32%,回收率为85.32%。采用硅胶柱层析法进行二次纯化,纯度可提高至43.5%。（4）大孔吸附树脂分离甘草酸的最佳工艺为:上样液浓度为2.66mg/mL,流速为3 BV/h,上样量为7 BV,之后用水进行清洗,50%乙醇洗脱,洗脱流速为6 BV/h,洗脱体积为12 BV。在此条件下,甘草酸的纯度为33.63%,回收率为92.58%。由于甘草酸不易精制,通常将其转变为甘草酸单铵盐,通过酸碱沉淀法可得无色甘草酸单铵盐晶体,纯度为89.01%。（5）高压喷雾逆流提取光甘草定和甘草酸工业化生产工艺的研究,具体实施工艺为:将光果甘草药材放置于粉碎机中粉碎,粉碎后过60目筛网;取药材粉末加入6倍量60%乙醇搅拌浸泡1 h,搅拌速率为60 r/min;在3.0 Mpa高压柱塞泵的工作压力下室温提取1次,提取液过滤浓缩干燥得到光果甘草提取物,在此条件下,光甘草定一次雾化提取率为77.68%,甘草酸一次雾化提取率为83.80%。该工艺具有高效、节能、绿色环保的优点,适合于大规模工业化生产光甘草定和甘草酸。
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