酶联免疫吸附测定法（ELISA）是利用酶标抗原或酶标抗体以检测相应抗体或抗原的一种免疫学标记技术。一直以来,提高分析灵敏度是ELISA领域的研究主题,其推动了一系列的信号放大的新策略和技术的发展。将新型功能纳米材料应用于ELISA中,可以获得更宽的检测范围,更低的检测限和更高的灵敏度,具有很好的应用前景。本研究结合免疫学原理和金纳米颗粒高比表面积等特点,利用金纳米颗粒为信号载体,辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗为信号探针,建立了一种基于金纳米颗粒信号增强的酶联免疫吸附测定法（AuNPs-HRP-IgG IC-ELISA）,进一步提高传统ELISA的灵敏度,实现了恩诺沙星大批量、快速、高灵敏检测。主要研究内容和结果如下:1.金纳米颗粒的制备与表征。本研究采用柠檬酸三钠还原法来制备金纳米颗粒。通过添加不同量的柠檬酸三钠,制备了18 nm,25 nm,33 nm,44 nm四种粒径的金纳米颗粒,通过目测、UV-vis、聚沉实验和透射电镜对其进行表征。结果表明金纳米颗粒溶液外观澄清透明,呈红色,无肉眼可见的颗粒沉淀,颗粒分散均匀,在400-700 nm波长区间内有单一最大吸收峰,且有较窄的半峰宽,其中25nm,33 nm,44 nm粒径的金纳米颗粒发生不同程度的聚集情况,18nm粒径的金纳米颗粒无聚集。2.AuNPs-HRP-IgG探针的制备与表征。利用金纳米颗粒和HRP-IgG之间的静电吸附作用原理,合成AuNPs-HRP-IgG探针。确定了单位体积的金纳米颗粒与HRP-IgG标记的pH约为8.0,HRP-IgG添加量为20μg/mL。采取UV-vis、透射电镜和ELISA对其进行表征,结果表明将AuNPs与HRP-IgG结合后,吸光度明显下降,其最大吸收峰由519nm红移至525nm,修饰后的金纳米颗粒粒径均一,分散性良好初步判断偶联成功,AuNPs-HRP-IgG探针的结合率能达70%以上。3.AuNPs-HRP-IgG IC-ELISA工作条件的优化与标准曲线的建立。对包被原包被浓度和抗体稀释倍数、封闭液、包被条件以及AuNPs-HRP-IgG探针稀释倍数进行了优化,获得最佳反应条件,建立了金纳米颗粒信号增强IC-ELISA。结果显示该方法在0.16～500 ng/mL的范围呈现良好的线性关系,灵敏度（IC50）为0.24ng/mL,最低检测限（IC15）可以达到5.0×10-4ng/mL。对诺氟沙星、氧氟沙星以及环丙沙星的交叉反应率均小于0.1%,说明该方法的特异性较好。该AuNPs-HRP-IgG IC-ELISA方法的实用性得到了样品添加回收实验和商业化ELISA检测试剂盒的验证,其在牛奶样品中的加标回收率可达80.52%-102.66%。本研究建立的金纳米颗粒信号增强IC-ELISA特异性强,灵敏度高,结果准确可靠,能满足食品中恩诺沙星的检测,此信号放大系统策略主要是以金纳米颗粒为载体,搭载多个二抗,实现信号放大,为其他食品危害物质的精准检测技术开发提供了很好的理论基础和检测平台。