前言 旋毛形线虫[Trichinella spiralis Owen 1835(Rialliet，1895)，简称旋毛虫]引起的旋毛虫病是一种人兽共患的寄生虫病，可在人及150多种哺乳动物间广泛传播。近年来，我国部分省区的旋毛虫感染有上升趋势，给人畜造成了严重危害。 有关旋毛虫种株的研究是进行各种深入研究的基本前提，一直是旋毛虫的研究热点。长期以来国内外有关旋毛虫的种株分类存在很大的争议。70年代以前，人们认为旋毛虫只有一个种：T.spiralis(Ts、T1)。1979年Boev提出旋毛虫有4个种：Ts、Tna(T.nativa、T2)、Tp(T.pseudospiralis、T4)、Tne(T.nelsoni、T7)。而Dick(1983)却认为Ts是唯一的种，Tna、Tne、Tp应视为三个亚种。随着分子生物学技术的发展，尤其是限制性片段长度多态性(RFLP)、随机扩增多态性DNA(RAPD)的应用，至目前国外的种株研究工作进展明显，多认同将旋毛虫属分为7个种：T1、T2、T3(T.britovi、Tbr)、T4、T5(T. murrelli)、T7、T10(T. papuae)和3个分类地位尚未确定的基因型：T6、T8、T9。 近年来，国内很多学者通过同工酶分析、等电聚焦技术、扩增长度片断多态性(AFLP)和RFLP等研究，认为我国的猪体与犬体旋毛虫间存在明显差异，属于两个不同的种，因此，我国至少存在两种旋毛虫；但也有人持不同意见，认为二者间的亲缘关系较近，属同一种群。另外，在旋毛虫种株的分类与地理分布的关系等方面也存在着不同见地。 RAPD技术是Williams和Welsh于1990年创建的一项DNA多态性检测技术。它是利用碱基顺序随机排列的寡核苷酸(通常为10聚体）为引物，对目的基因组DNA进行PCR随机扩增，由于物种的不同，其基因组中与引物相匹配的碱基序列的空间位置和数目都有可能不同，所以扩增产物的大小和数量也不同，通过对扩增产物的琼脂糖凝胶电泳可以获得详细而精确的DNA指纹图谱，再根据扩增产物的带型及强弱即可分析不同种株间的某些区域乃至整个基因组DNA的差异性。要想了解基因组更多的遗传信息，则需用尽可能多的引物进行随机扩增，这是RAPD技术的一个重要特点。目前，国内应用RAPD技术进行旋毛虫研究的报道有3篇，尽管应用的引物量不是很多（分别为＊lj条X但为旋毛虫种株研究奠定了良好的开端。 本实验采用较多的新的随机引物（包括单一引物和复合引物人扩大被检测的基因组的范围，力求获得更多新的遗传信息，进一步对国内J的旋毛虫种株间差异及虫种归属进行探讨，确定宿主种类、地理分布对种株的影响。另外，进一步通过聚类分析确定各种株之间的亲缘关系，以了解它们在进化过程中的分化情况，为旋毛虫种株进一步的基因型鉴定和分类积累有意义的资料，同时本实验也为旋毛虫病的检测、诊断及流行病研究提供了理论依据。 实验方法 采用8组单一引物和12组复合引物分别对我国三株旋毛虫（黑龙江五常犬、黑龙江海伦猪及河南新野猪）和两个国际标准虫种 ［ TI（波兰家猪八TZ（挪威北极熊门的基因组 DNA进行随机扩增，扩增产物经1．2％琼脂糖凝胶电泳分离FB染色，在GDS8000凝胶分析仪上照相。根据分子量标记的迁移率，应用Gelwrk门DIntermediate软件计算各扩增DNA片段的长度K人并依照RAPD技术现行的统计方法进行数据分析，根据Net’s等的公式：SI＝ ·2·ZNw八 Nx＋N＊计算出随机扩增多态性 DNA片段的共享度（也称遗传相似指数人根据遗传相似指数，用SPSS10．0统计分析软件对各种株间的亲缘关系进行聚类分析。 实验结果 1．单一引物对旋毛虫基因组DNA扩增反应的结果： 弓物 P－01、P－03、P－04、P－05、P－06分别在 6次重复扩增中产生稳定的扩增带型，共得到5组清晰且重复性较好的DNA指纹图谱。 弓物 P－01、P－03、P－04、P－06既得到了犬株与猪株旋毛虫的种间共有片段，又得到黑龙江犬株与国际标准虫种h，河南猪株、黑龙江猪株与国际标准虫种TI的种内共有片段。引物P－05仅得到种内共有片段。 引物P－03丁一04、P－06的扩增图谱显示，黑龙江猪株、河南猪株与0，黑龙江犬株与h所获的扩增带的数量和位置相同。引物P－01的扩增图谱表明黑龙江大株与D的指纹图谱不完全一致，黑龙江猪株、河南猪株与D的指纹图谱一致。引物P－05的扩增图谱显示黑龙江猪株与河南猪株的指纹图谱存在差异，而河南猪株和n的扩增图谱、黑龙江犬株和h的扩增图谱完全一致。 2．复合引物对旋毛虫基因组DNA扩增反应的结果： 将单一引物两两组合，其中N二一P02、P03－P04、P05－P06。poZ－P06分别在6次重复试验中产生了重复性较好的DNA指纹图谱。 以上4种复合引物均既获得犬株旋毛虫与猪株旋毛虫的种间共有片段，又得到黑龙江犬株与h、河南猪株和黑龙江猪株与血的种内共有片段。引物P03－P04、P05－r所得的DNA指纹图 ·3·谱显示黑龙江犬株与TI的DNA指纹图谱一致，黑龙江猪株、河南