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目的:(1)观察不同浓度IL-1β诱导下人牙周膜成纤维细胞中COX-2的表达情况。(2)观察塞来昔布对IL-1β诱导的人牙周膜成纤维细胞表达COX-2和IL-8的影响,为探讨塞来昔布控制牙周组织炎症的临床应用提供实验依据。方法:(1)体外原代培养人牙周膜成纤维细胞,并对其来源进行鉴定。(2)选取5~8代人牙周膜成纤维细胞,随机分为正常对照组和实验组,正常对照组加入无血清培养液,实验组分别加入含0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml IL-1β的无血清培养液,采用免疫组织化学方法和ELISA法检测HPLFs中COX-2的表达状况,并探寻实验浓度范围内,引起最强炎症的IL-1β浓度。(3)选取5~8代人牙周膜成纤维细胞,随机分为对照组和实验组,实验组为在含10ng/ml IL-1β的无血清培养基中分别加入0μM、10μM、25μM、50μM、100μM以二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)助溶的塞来昔布;对照组为含有同样浓度DMSO的无血清培养基。采用ELISA法检测塞来昔布对IL-1β诱导下人牙周膜成纤维细胞中COX-2和IL-8表达情况的影响。结果:(1)体外成功的培养人牙周膜成纤维细胞,倒置显微镜下:细胞为长梭形或者星形,呈典型的成纤维样细胞形态;免疫组织化学染色:人牙周膜成纤维细胞抗角蛋白染色阴性,抗波形丝蛋白染色阳性,表现出来源于中胚层的成纤维样细胞特性。(2)不同浓度的IL-1β干预人牙周膜成纤维细胞后COX-2表达的免疫组化结果显示:正常对照组中COX-2呈阴性表达,经IL-1β诱导后的人牙周膜成纤维细胞中COX-2在胞浆和核膜呈阳性表达;且COX-2表达强度随IL-1β诱导浓度的升高呈现增强的趋势(P<0.05)。ELISA检测结果同样证实了COX-2的表达随IL-1β诱导浓度的升高而增强(P<0.05)。(3)塞来昔布对经IL-1β诱导下HPLFs中COX-2表达影响的实验显示:不同浓度的塞来昔布均可减少致炎后HPLFs中COX-2的表达,与未加药组比较,P<0.05;且随着塞来昔布浓度的增加,HPLFs中COX-2表达呈现逐渐递减的趋势,实验各组间比较,P<0.05。对IL-8表达影响的实验显示:加有不同浓度塞来昔布的各实验组中,IL-8表达均有不同程度的减少,除10μM组外,其他加药组与未加药组比较,P<0.05;当塞来昔布的浓度在25μM内时,IL-8的表达随着塞来昔布浓度的升高而减少,在25μM时其表达最弱,与对照组比较,P>0.05;当塞来昔布的浓度大于25μM时,IL-8的表达随着塞来昔布浓度的增加有小幅度的增高,但组间比较,差异无统计学意义,P>0.05。结论:(1)组织块培养法培养牙周膜成纤维细胞步骤简单易掌握,可为探讨牙周组织相关疾病提供实验条件。(2)IL-1β诱导人牙周膜成纤维细胞后有COX-2表达,且COX-2的表达强度与IL-1β浓度呈正相关关系,说明COX-2与牙周病的发生发展存在一定关系。(3)塞来昔布可有效减少经IL-1β干预后的人牙周膜成纤维细胞中炎症因子COX-2和IL-8的表达。