论文部分内容阅读
目的通过研究酸枣仁皂苷对AA肉鸡下丘脑NPY、AgRP、GABAA-α1、MC4R和POMC采食调控因子表达的影响,探明酸枣仁皂苷调节热应激肉鸡采食量的作用途径。进而揭示酸枣仁皂苷改善热应激肉鸡生产性能的作用机制。方法本实验所用样本为项目组进行热应激(正常温度和34℃)和饲粮中添加酸枣仁皂苷(饲粮中分别添加0、1.0 mg/kg酸枣仁皂苷)饲养试验所获的4周龄和6周龄AA+肉鸡下丘脑样本。用Real-time PCR和Western Blotting的方法检测下丘脑中NPY、AgRP、GABAA-α1、MC4R和POMC基因的mRNA和蛋白表达量,应用SPSS软件进行统计分析,揭示饲粮中添加酸枣仁皂苷的调控作用及肉鸡下丘脑采食量调控基因表达与肉鸡生长性能之间的关系。结果1、饲粮中添加酸枣仁皂苷对4周龄肉鸡下丘脑采食量调控基因mRNA和蛋白表达产生了影响。4周龄肉鸡公鸡下丘脑NPY和GABAA-α1 mRNA极显著低于母鸡(P<0.01),而公母鸡下丘脑AgRP、MC4R和POMC mRNA无显著差异(P>0.05)。饲粮中添加酸枣仁皂苷,公鸡下丘脑NPY、MC4R和POMC mRNA极显著提高(P<0.01),而母鸡变化不显著(P>0.05)。母鸡下丘脑GABAA-α1和POMC蛋白极显著高于公鸡(P<0.01),AgRP蛋白极显著低于公鸡(P<0.01),NPY和MC4R差异不显著。饲粮中添加酸枣仁皂苷,公鸡下丘脑NPY蛋白(P<0.01)和GABAA-α1蛋白(P<0.05)分别极显著和显著提高,母鸡下丘脑AgRP蛋白极显著提高(P<0.01)。2、热应激和饲粮中添加酸枣仁皂苷对6周龄肉鸡下丘脑采食量调控基因mRNA和蛋白表达具有影响。34℃热应激极显著提高了公母鸡下丘脑AgRP、MC4R、NPY mRNA(P<0.01),POMC mRNA极显著降低(P<0.01),而GABAA-α1仅公鸡差异极显著。热应激肉鸡饲粮中添加酸枣仁皂苷,显著或极显著降低了公母鸡下丘脑AgRP、MC4R、NPY mRNA(P<0.01或P<0.05)。热应激极显著降低了公鸡下丘脑GABAA-α1(P<0.05)、MC4R和POMC蛋白(P<0.01),母鸡下丘脑NPY和POMC蛋白(P<0.01)极显著降低,MC4R蛋白极显著提高(P<0.01)。饲粮中添加酸枣仁皂苷,极显著提高热应激肉鸡下丘脑AgRP、POMC、GABAA-α1蛋白(公鸡)(P<0.01),显著提高NPY蛋白(母鸡)(P<0.05),极显著提高公鸡MC4R蛋白(P<0.01)。3、高温热应激和饲粮中添加酸枣仁皂苷,影响了下丘脑采食相关基因之间的相互作用关系。经相关分析,6周龄公鸡下丘脑POMC蛋白与GABAA-α1蛋白极显著正相关(r=0.975,P=0.005),与MC4R蛋白(r=0.956,P=0.011)和AgRP蛋白(r=0.929,P=0.023)呈显著正相关,MC4R蛋白分别与AgRP蛋白(r=0.968,P=0.007)和GABAA-α1蛋白(r=0.881,P=0.048)呈极显著或显著正相关;母鸡ADG与下丘脑MC4R蛋白显著负相关(r=-0.902,P=0.036),与下丘脑NPY蛋白显著正相关(r=0.949,P=0.014),POMC蛋白与AgRP蛋白显著正相关(r=0.916,P=0.029)。6周龄肉鸡公母鸡下丘脑MC4R蛋白分别与AgRP蛋白(r=0.710,P=0.021)和GABAA-α1蛋白(r=0.726,P=0.018)显著正相关,POMC蛋白分别与AgRP蛋白(r=0.878,P=0.001)、MC4R蛋白(r=0.780,P=0.008)、GABAA-α1蛋白(r=0.940,P=0.000)呈极显著正相关,GABAA-α1蛋白与AgRP蛋白显著正相关(r=0.686,P=0.029)。用4周龄和6周龄公母鸡下丘脑采食量相关基因蛋白和生长性能指标进行相关分析发现,肉鸡的平均日采食量(Average daily feed intake,ADFI)与下丘脑AgRP蛋白显著正相关(r=0.559,P=0.038),平均日增重(Average daily gain,ADG)与NPY蛋白显著正相关(r=0.589,P=0.027);POMC蛋白分别与GABAA-α1蛋白(r=0.875,P=0.000)和MC4R蛋白(r=0.647,P=0.012)显著或极显著正相关;AgRP蛋白与MC4R蛋白极显著正相关(r=0.688,P=0.007)。结论1、饲粮中添加酸枣仁皂苷,对4周龄肉鸡、6周龄热应激肉鸡下丘脑NPY、AgRP、MC4R、POMC、GABAA-α1基因表达有调控作用,缓解了热应激造成的负效应。2、6周龄母鸡ADG与下丘脑MC4R蛋白显著负相关,与下丘脑NPY蛋白显著正相关;4-6周龄肉鸡的ADFI与下丘脑AgRP蛋白显著正相关,ADG与NPY蛋白显著正相关。3、酸枣仁皂苷最佳添加时机为热应激期间。