两种芸薹属植物遗传多样性及一种抗除草剂油菜的育种利用研究

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油菜是我国种植的最主要油料作物,具有显著的杂种优势。化学杀雄是油菜杂种优势利用的重要途径之一。在化学杀雄制种中,将具有抗化学杀雄剂(主要有效成分是除草剂)的油菜材料作为父本,父本无需遮挡,可以简化制种程序;同时,该类杂交种可以使用除草剂进行化学除草。因此,抗除草剂油菜的选育具有非常重要的意义。种质资源遗传多样性评价是资源保护和育种的重要基础工作。本课题组前期利用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变甘蓝型油菜(Brassica napus L.)“中双9号”,创造了一个变异类型丰富的突变体库,M2代喷施苯磺隆(TBM)筛选到一个抗TBM的突变体(K5)。本研究将以该突变体后代纯合抗性株系为核心材料,进行以下研究:1)以100份芸薹属材料,主要是甘蓝型油菜和芥菜型油菜,利用SSR(Simple Sequence Repeats)、SRAP(Sequence-related Amplified Polymorphism)和ISJ(Intron-exon Splice Junctions)分子标记,对其进行遗传多样性评价,并利用本课题组发明的一步多重PCR技术鉴定这些材料的细胞质类型;2)化杀剂对不同品系油菜的花器官形态特征、花粉育性、制种产量的影响。研究所得结果如下:1、对100份芸薹属植物材料,其中包括50份芥菜型油菜、31份甘蓝型油菜、5份白菜型油菜、5份埃塞俄比亚芥、4份甘蓝、3份黒芥、1份芸芥和1份板蓝根,利用SSR、SRAP及ISJ分子标记对其遗传多样性进行了分析。结果表明,23对SSR引物共扩增出87个多态性条带,不同引物扩增出1-6个多态性条带,平均PIC值(Polymorphic information content)为0.64;27对SRAP引物共扩增出218个多态性条带,平均PIC值为0.85;8个ISJ引物共扩增出72个多态性条带,不同引物扩增出6-13个多态性条带,平均PIC值为0.81。基于所有的377个多态性分子标记(SSR、SRAP和ISJ标记),聚类分析将参试的100份材料聚为6大类,所有参试的31份甘蓝型油菜被聚为一类,所有参试的50份芥菜型油菜被聚在一起,其他类型材料也根据类型被聚在一起,聚类结果与材料类型、系谱关系、地理来源一致。主成分分析及群体结构分析结果,与聚类分析结果基本一致。一步多重PCR分析结果显示,参试的100份芸薹属植物材料中,50份芥菜型油菜中,49份材料为Cam类型,1份为Nap类型;31份甘蓝型油菜细胞质类型相对丰富,11份Pol类型,3份Cam类型,15份Nap类型,2份混合类型。说明参试芥菜型材料细胞质类型单一,甘蓝型油菜细胞质类型相对丰富。2、以甘蓝型油菜突变体K5和12个核心亲本为材料,进行化学杀雄处理,配置化杀杂交种。喷施0.1%化杀剂CHA-XN01后,发现12个核心亲本均表现出花丝变短、雄蕊干瘪,花粉失活,而喷施化杀剂的K5和未喷化杀剂的对照品种ZS09花器官正常,花粉活性不受影响。K5制种产量达109.72 Kg/667m2,为参试材料最高,说明化杀剂对K5产量影响最小,其余12个亲本材料的制种产量介于21.01-83.65kg/667m2,说明除个别亲本外,大多数亲本的制种产量结果可以接受。
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