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苯并[a]芘是由5个苯环组成的一种多环芳烃(PAH)化合物,是一切碳物质热分解的产物。由于性质稳定,来源广泛,致癌性极强,BaP被世界卫生组织国际癌症研究中心指定为一级致癌物质。
BaP在体内的代谢途径早已研究得很清楚。BaP在体内P—450酶系的作用下可产生10余种代谢产物,其中反式BPDE(anti—BPDE)是BaP代谢的终致癌物,它带有亲电子基团,可与细胞大分子DNA中的亲核基团鸟嘌呤的外环胺基端结合,还可与转录因子结合,从而损伤DNA,进而激活原癌基因或使抑癌基因失活,启动致突变/致癌过程。
细胞周期检控点(cell cycle checkpoint)是现今国际上较为热门的研究点之一,也是一个比较新的领域。细胞周期检控点是细胞在长期的进化过程中逐渐形成的一套能够检测细胞周期运行的维护细胞稳定性和完整性的机制,主要包括DNA损伤检控点(DNA damage checkpoint)、DNA复制检控点(DNA replication checkpoint)和纺锤体组装检控点(spindle assembly cbeckpoint)。DNA损伤检控点能够检测受损或者结构异常的DNA,并启动检控点信号传导途径。DNA损伤检控点信号传导路径的激活可引发一系列下游生物学事件,如细胞周期阻滞和对受损DNA的有效修复。
本论文利用MTT、流式细胞、单细胞凝胶电泳和Western Blot等技术,选用国内建株的转移性胃癌细胞株SGC—7901为对象,发现,作为环境致癌剂,BaP不仅能造成DNA的双链断裂,诱导细胞周期的阻滞,高浓度的BaP还能诱导细胞凋亡,而且,我们的研究发现,一定作用浓度和时间的BaP预处理能抑制放射模拟剂NCS激活的DNA损伤信号中部分激酶的磷酸化,例如,ATM下游信号传导激酶Chk2在苏氨酸68个残基位点上的磷酸化程度能为BaP的预处理抑制,Brcal S1497位点的磷酸化程度也大大降低了,ATR下游信号传递激酶Chk1 S317的磷酸化程度也有所降低;组蛋白H2AX在serine139位点的磷酸化也被抑制了,并且,Chk2、Brcal和Chk1、H2AX对BaP抑制作用的敏感性存在差别,就本研究看来,BaP抑制Chk2、Brcal磷酸化所需的浓度低于Chk1、H2AX,而前二者对BaP的敏感性范围比后二者窄。
综上所述,我们的实验表明了BaP作为一种传统的环境致癌物质,不仅能抑制细胞的生长、诱导细胞周期的阻滞和造成DNA的断裂,而且我们的研究发现,BaP能下调DNA损伤检控信号途径中Chk1(S317)、Chk2(T68)、Brcal(S1497)和H2AX(S139)的磷酸化水平,这也许意味着BaP对人类健康的危害,不仅因为它造成的DNA损伤造成基因突变,启动致癌过程,而且BaP通过抑制DNA损伤检控信号蛋白的磷酸化,从而抑制DNA损伤检控反应,钝化细胞自我修复机制,使得人体无法对外界基因毒性压力造成的损伤做出及时有效的反应,人体抵抗外界因素的能力下降。我们的研究为BaP致癌提供了一个新的分子学观点。