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[目的]Delta-like ligand 4(DLL4)是肿瘤血管发生的关键调节因子。血管内皮生长因子(VEGF)是在血管内皮细胞中表达的生长因子,能促进肿瘤血管形成,提供肿瘤生成所需要的氧和营养成份,并增加血管和淋巴管通透性而促进肿瘤生长和转移。本研究通过检测胃癌(Gastric cancer,GC)组织中DLL4蛋白的表达情况探讨DLL4的表达与临床病理特征之间的关系,比较胃癌不同中医(Traditional Chinese Medicine,TCM)证型患者的DLL4蛋白表达水平。以及验证DLL4与VEGF在胃癌细胞中的表达情况,检测干扰DLL4的表达对VEGF表达的影响,并初步探讨DLL4对胃癌细胞增殖和迁移能力的作用及机制。[方法]1、收集44例胃肠外科手术切除的胃癌组织及距病灶约5cm的癌旁正常胃粘膜组织制作组织切片,采用免疫组化检测胃癌组织及癌旁组织DLL4蛋白的表达,并分析DLL4蛋白表达与胃癌临床病理特征的之间的关系。对切除胃癌组织的患者进行中医辨证分型,分析胃癌证型与分期的相关性以及比较胃癌不同中医证型患者的DLL4蛋白表达水平。2、提取胃癌AGS、SGC-7901细胞株和正常胃黏膜GES-1细胞株的总RNA,用RT-PCR验证细胞中DLL4、VEGFmRNA的表达。3、构建4种靶向DLL4基因的干扰RNAi质粒及1种对照质粒,用FuGENE?HD介导转染胃癌AGS细胞,嘌呤霉素(浓度为0.2μg/mL)筛选建立稳定细胞株。4、提取DLL4-RNAi的干扰组和CON077对照组胃癌细胞株总RNA,RT-PCR检测DLL4、VEGF的mRNA表达情况。5、选取转染后对DLL4、VEGF表达有明显干扰作用的胃癌AGS细胞株DLL4-RNAi(34251)和DLL4-RNAi(34253)组为实验组,以未转染的胃癌AGS细胞设为对照组,MTT检测DLL4被干扰后胃癌AGS细胞的增殖情况。6、选取对DLL4表达有明显干扰作用的胃癌AGS细胞株DLL4-RNAi(34253)组为实验组,未转染过的胃癌AGS细胞为对照组,划痕实验观察干扰DLL4表达后胃癌AGS细胞的迁移情况。[结果]1、在44例胃癌组织标本中,DLL4蛋白染色呈棕黄色阳性颗粒,主要分布于肿瘤细胞膜和细胞质。胃癌组织DLL4蛋白阳性表达率平均为70.5%,正常胃癌粘膜组织未见棕黄色颗粒。DLL4蛋白在胃癌中的表达与肿瘤的浸润深度显著相关(p<0.01)、淋巴结转移有关(p<0.05)和临床分期显著有关(p<0.01),而与患者的性别、年龄、肿瘤位置等因素无关(p>0.05)。2、6种中医证型在胃癌分期中的分布不同,χ2=11.071,p<0.05,差异具有统计学意义。不同中医证型胃癌组织中DLL4的阳性表达不同,χ2=12.774,p<0.05,差异具有统计学意义。胃癌6种中医证型DLL4阳性表达率由高到低依次为气滞血瘀证、脾胃虚寒证、胃热伤阴证、气血亏虚证、痰湿凝结证、肝气犯胃证。3、RT-PCR结果显示DLL4、VEGFmRNA在胃癌AGS、SGC-7901细胞株的表达均高于正常胃黏膜GES-1细胞。4、RT-PCR结果显示,构建的4个DLL4-RNAi序列其中有3个质粒能抑制DLL4的表达,其中 DLL4-RNAi(34253)、DLL4-RNAi(34251)抑制 DLL4mRNA 表达与对照组相比,差异有统计学意义(p<0.05);DLL4-RNAi(34251)抑制VEGFmRNA表达与对照组相比,差异有统计学意义(p<0.05),DLL4-RNAi(34253)能有效抑制VEGFmRNA表达。且VEGF mRNA表达量与DLL4表达量之间存在正相关关系。5、MTT 实验结果显示,转染 DLL4-RNAi(34253)和 DLL4-RNAi(34251)的 AGS 细胞与对照组的细胞相比增殖速率减慢,其中转染DLL4-RNAi(34253)的胃癌细胞增殖与对照组比差异极显著(p<0.01)。6、划痕实验结果显示,转染DLL4-RNAi(34253)的AGS细胞的迁移率比对照组明显降低(p<0.01)。[结论]胃癌组织中高表达DLL4蛋白,DLL4蛋白的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和临床分期相关,与患者的性别、年龄、肿瘤位置无关。中医证型与胃癌TNM分期之间存在相关性,脾胃虚寒证、肝气犯胃证多见于早期胃癌。胃癌不同中医证型之间,DLL4阳性表达存在差异。成功构建了干扰DLL4表达的质粒,建立了稳定抑制DLL4基因表达的胃癌AGS细胞株。抑制胃癌AGS细胞中DL4的表达可减少VEGF的表达,并降低胃癌AGS细胞的增殖和迁移的能力。该研究有望为胃癌的血管靶向治疗提供理论基础。