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禽腺病毒(Fowl Adenovirus,FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属,根据抗原性的差异,可以分为3个亚群:Ⅰ群、Ⅱ群和Ⅲ群。Ⅰ群禽腺病毒共有12个血清型,它们具有共同的群抗原。流行病学调查发现,FAdV在世界范围内的分布广泛,不同日龄的家禽均易感。FAdV感染多以亚临床症状为主,而急性感染则主要引起包涵体肝炎,肝炎-心包积液综合症以及肌胃糜烂等疾病。其中,I群血清4型禽腺病毒(Fowl Adenovirus serotype 4,FAdV-4)可引起鸡“心包积水-肝炎综合征”(Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS),其典型症状是3-5周龄肉鸡、蛋鸡突然死亡,心包蓄积黄色水样或胶冻样物,肝脏肿大、质脆色淡,肾脏肿大、出血。自2013年以来,国内大部分地区的鸡群中暴发肝炎-心包积液综合症,感染鸡群的死淘率高达80%,对国内的养鸡业造成了严重的经济损失。然而,建立快速准确的FAdV血清学检测方法具有重要意义。FAdV-4的hexon基因编码的六邻体蛋白是病毒主要结构蛋白,包含了主要的属和亚属特异性抗原决定簇,该基因是主要保护性抗原基因。本研究选取FAdV-4的Hexon六邻体蛋白,预测免疫原性较强的区域,设计引物扩增hexon基因部分序列,并将其克隆至pET-32a(+)原核表达载体中,阳性质粒命名为pET-hexon。将阳性质粒转化BL21感受态大肠杆菌,IPTG诱导并通过SDS-PAGE电泳分析表达蛋白的可溶性,通过改变诱导时间、诱导温度、以及IPTG浓度确定最佳诱导条件,并通过western-blot进行验证。结果成功对FAdV-4的Hexon蛋白进行了表达,诱导表达温度为30℃、IPTG浓度为1mM、诱导时间为3h,该重组蛋白主要以包涵体的形式进行表达。Western blot分析结果证明,重组Hexon六邻体蛋白可以与鼠抗His单抗和鸡FAdV-4阳性血清结合并显示出特异性条带,表明该蛋白具有较好反应原性。纯化的Hexon重组蛋白的表达为IFA检测方法和FAdV-4 ELISA抗体检测方法提供了材料。将纯化的Hexon重组蛋白通过颈部皮下免疫小鼠,每只免疫100μg,共免疫三次。采集免疫小鼠血清,制备鼠抗Hexon多抗体抗体。以制备的多克隆抗体为一抗,FITC标记的羊抗鼠lgG为二抗,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测感染了FAdV-4的鸡胚原代肾细胞(CEK)。结果表明,该多克隆抗体可特异性识别FAdV-4感染的CEK,感染细胞的胞质被染为绿色。鼠抗Hexon多抗体抗体的制备对FAdV-4的病原学诊断具有较高的实用价值。利用Hexon重组蛋白作为间接ELISA方法的包被抗原,建立检测FAdV-4抗体间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被浓度为4μg/mL;最佳一抗血清稀释度为1:200;最佳血清作用时间为60min;酶标二抗最佳稀释度为1:2500;最佳二抗作用时间为45min;最佳底物显色反应时间为15min。本研究建立的ELISA检测方法与新城疫病毒、禽流感病毒、鸡传染性法氏囊病、禽白血病病毒、马立克病毒、禽网状内皮增生病毒阳性血清以及SPF鸡血清均没有发生反应,OD值均低于0.312,仅与检测的抗FAdV-4的阳性血清反应。临床应用检测的结果说明,该ELISA能够用于检测FAdV-4鸡群的FAdV抗体水平。