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目的:
胃癌(Gastric Carcinoma)是最常见的消化道恶性肿瘤,其发生发展是一个多因素多阶段的过程,分子生物学研究显示原癌基因活化、抑癌基因失活、抗凋亡基因活性增强、促凋亡基因活性减弱等因素综合作用可导致细胞增殖失控、恶性转化、侵袭及转移。活化白细胞黏附分子(activated leukocyte cell adhesion molecule,ALCAM),也称CD166/MEMD,是一种广泛存在于人体各个组织器官的糖蛋白,属于免疫球蛋白基因超家族的成员,是淋巴细胞抗原CD6的配基。ALCAM在多种肿瘤细胞表面高表达,参与肿瘤的发生发展,与多种肿瘤的生长和转移密切相关,但是,目前国内外欠缺ALCAM表达与胃癌关系的研究报道,故本研究采用SYBR GreenI实时定量RT-PCR及免疫组化法检测ALCAM的mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌临床病理的关系。
材料与方法:
标本来源于广州医学院附属广州市第一人民医院2006年01月至2007年11月外科手术切除并经病理确诊的33例新鲜胃癌组织及正常胃组织,男21例,女12例；年龄34～81岁,平均年龄58.3±13.1岁；高分化腺癌3例,中分化腺癌9例,低分化腺癌21例；伴淋巴结转移阳性21例,无淋巴结转移12例；按照国际统一的胃癌TNM分期方法:I期2例,II期8例,Ⅲ期11例,IV期12例；患者术前均未接受任何包括放疗、化疗或内镜下光动力学等任何抗肿瘤治疗。采用SYBR Green I实时定量RT-PCR检测33例胃癌组织及正常胃组织中ALCAM的mRNA表达水平,免疫组化方法检测石蜡切片中ALCAM的蛋白表达水平,运用SPSS15.0统计软件进行统计分析,分析其表达情况与临床病理资料的相关性。
结果:胃癌及正常胃组织提取出来的总RNA经紫外分光光度计检测及1％琼脂糖凝胶电泳,结果表明提取的总RNA纯度高,降解少,可用于后续的RT-PCR实验。内参的GAPDH和ALCAM基因PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳显示产物是目的条带,融解曲线均为锐利单峰,且各自的融解温度均一,显示无污染、引物二聚体和假阳性现象。GAPDH和ALCAM基因定量标准曲线的回归系数γ2分别为0.999、0.994,表明达到阈值时的循环数和起始模版的浓度呈高度的线性关系。
胃癌组织中ALCAM的mRNA表达水平(M=0.0087)高于正常胃组织(M=0.0011,P<0.05),在有淋巴结转移的胃癌组织中的表达(M=0.0174.)显著高于无淋巴结转移的胃癌组织(M=0.0079,P<0.05),低分化癌ALCAM的mRNA表达(M=0.0128.)高于中高分化癌(M=0.0052,P<0.05)。ALCAM基因的mRNA表达与性别、年龄及TNM分期无明显相关(P>0.05)。
免疫组化检测显示：无论胞浆阳性染色或胞膜阳性染色胃癌组织中ALCAM阳性细胞的比例明显高于正常胃组织,差异有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移的胃癌组织中ALCAM蛋白胞浆表达水平明显高于无淋巴结转移的胃癌组织(P<0.05),但ALCAM胞膜表达与淋巴结表达无关(P>0.05),无论胞膜阳性染色或胞浆阳性染色,均未发现与患者的年龄、性别、肿瘤组织学分级及TNM分期有关(P>0.05)。
胃癌组织中ALCAM的蛋白水平无论是胞浆表达或胞膜表达均与ALCAM的mRNA的表达水平无直线相关关系(P>0.05)。
结论:
1、胃癌组织中ALCAM高表达,且与转移有关。
2、胞浆ALCAM高表达与胃癌淋巴结转移有关。
3、ALCAM是一项有潜在价值的胃癌相关标志物。