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金黄色葡萄球菌是一种有众多致病因素(烧伤创面感染、急性肝功能衰竭等)的病原菌。其致病因素复杂、耐药性不断增强,成为了当今世界重要的卫生安全问题之一。金黄色葡萄球菌能产生多种致病性物质,如毒素、酶类和菌体的一些成份,该菌产生的主要毒素有:肠毒素(Staphylococcal enterotoxins,SEs)、葡萄球菌溶素、表皮剥脱毒素、杀白细胞素、毒性休克综合征毒素-1等;产生的主要酶类有:凝固酶、耐热核酸酶、葡激酶等,其中SEs在该菌的致病性中起着重要的作用。肠毒素会导致食物中毒,中毒性休克及许多过敏和自身免疫疾病。肠毒素是医院感染及食物中毒最重要的细菌性毒素之一,对肠毒素的检测由显重要,经过研究人员的努力,现有动物检测法、免疫扩散法、间接血凝技术法、荧光免疫技术法、生物传感器等。此外,肠毒素被积极用于临床的肿瘤治疗,SE是迄今已知为最有效的T细胞刺激剂,尤其人类T细胞对SE最为敏感;在每ml含几个pg的SE的浓度作用下就可显示其刺激T细胞的功效,这比任何生物化学或血清学检测法的灵敏度要高出几个数量级。因此,在关于肠毒素的疾病预防和抗癌产品的研发过程中要求用高灵敏度的检测方法进行肠毒素的检测。本研究以建立一种能灵敏地检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(SEI)的双抗夹心ELISA试剂盒为目的。首先将实验室已构建的重组SEI进行大量表达,经纯化后,以SEI蛋白免疫BALB/c小鼠,然后利用细胞融合技术,经过ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株,采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素I(SEI)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定,将阳性杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔,生产大量单克隆抗体。同时利用SEI免疫家兔,制备多克隆抗体。用单抗-多抗,多抗-单抗两种方式建立双抗夹心的方法,分析比较两者的线性及梯度,确定最佳的方法并测定检测范围,考核其灵敏度、精确度,最终建立高灵敏度,稳定的双抗夹心方法应用于SEI含量的检测。本研究成功表达了SEI融合蛋白;经过对小鼠进行免疫,利用细胞融合技术,有限稀释,获得两株杂交瘤细胞,顺利制备了单克隆抗体;经过免疫家兔,成功制备多克隆抗体,利用辛酸-硫酸铵沉淀法对抗体进行纯化。以纯化后的单抗为包被抗体,多抗为检测抗体制备高效、稳定的SEI双抗夹心测定法,该方法的最低检出限为0.03ng/ml,对标准品的检测范围为:0.6-1.2ng/ml;考查该方法的精密度,计算得其变异系数为2.21%。该方法能广泛应用于各类食物药物中肠毒素SEI的检测,减少各种中毒事件的发生,同时因该方法检出限低、灵敏度高,能积极应用于肠毒素抗肿瘤作用的临床研究。