生物样品中酒精代谢标志物乙基葡萄糖醛酸苷的GC-MS检测方法研究

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目的:运用气相色谱-质谱法建立酒精代谢标志物乙基葡萄糖醛酸苷的检测方法,优化生物样品尿液、血液和毛发的前处理方法,优化检测仪器的测定条件,力求回收率高、灵敏度和特异度高、结果准确的检测方法。方法:先使用乙基葡萄糖醛酸苷的标准品进行GC-MS检测,确定目标物的色谱峰及保留时间,然后用空白血液、尿液和毛发中添加标准品,将血液、尿液和毛发样品分别用SPE法(固相萃取法)和LLE法(液-液萃取法)两种方法进行预处理,沉淀生物样品中的蛋白质和其他对实验检测结果有干扰的杂质,提取目标物后使用不同的衍生化试剂进行衍生化反应,最终气相色谱-质谱法进行检测,检测使用FULL SCAN(全扫描)和SIM(选择离子)模式定性分析,定量分析用内标法(内标为EtG-D5)。结果:对血液、尿液、毛发标准系列样品所建立的方法进行方法学评估,分别绘制标准工作曲线。(1)乙基葡萄糖醛酸苷在血液中0.13μg/ml浓度范围内与色谱响应值间有良好线性关系(R2=0.9998),平均回收率范围为95.86101.88、准确度(标准偏差,SD)为1.522.91,相对标准偏差(RSD)为0.513.45;(2)EtG在尿液中0.13μg/ml浓度范围内与色谱响应值间有良好线性关系(R2=0.9992),平均回收率为98.10102.71,SD值为0.816.65,RSD值为0.279.94之间;(3)EtG在毛发中550 ng/mg浓度范围内与色谱响应值间有良好线性关系(R2=0.9949),平均回收率为75.1699.54,SD值为0.181.29,RSD值为0.804.91之间。(4)比较BSTFA/TMCS、PFPA和HFBA三种衍生化试剂的衍生效果,根据色谱图中基质峰的大小和质谱图中特征性碎片离子(m/z)的丰度,将BSTFA/TMCS和HFBA确定为较理想的衍生化试剂,其次为PFPA。(5)比较CNWBOND NH2柱子、Generik MAX柱子和UCT Clean-Screen ETG柱子对血液、尿液和毛发三种生物样品进行固相萃取,比较三种固相萃取柱子提取目标物EtG的回收率,结果显示,对于血样,Generik MAX柱子和UCT Clean-Screen ETG柱子的提取回收率高于CNWBOND NH2柱子的提取回收率,回收率差异有统计学意义(P<0.05);对于尿样,Generik MAX柱子、UCT Clean-Screen ETG柱子和CNWBOND NH2柱子的EtG回收率比较无显著性差异,差异无统计学意义(P>0.05);对于毛发,Generik MAX柱子的回收率高于UCT Clean-Screen ETG柱子和CNWBOND NH2柱子,回收率差异有统计学意义(P<0.05;(6)用SPE法(固相萃取)和LLE法(液-液萃取)两种方法预处理好的血液、尿液和毛发样品,比较目标物EtG的回收率,结果显示SPE萃取的回收率明显高于LLE法,回收率差异有有统计学意义(P<0.05)。结论:本实验建立的方法对饮酒者或酒精滥用者血液、尿液和毛发中检测乙基葡萄糖醛酸苷具有较好的灵敏度、准确度和线性关系,回收率高,对短时间内是否饮酒或酒驾司法鉴定以及戒酒诊疗提供可靠的参考数据,有很好的实际应用价值。
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