【摘 要】
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水蛭,属环节动物门(Annelida)、蛭纲(Hirudinea),雌雄同体、异体受精,广泛分布于海洋、湖泊、河流等淡水环境以及潮湿的土地,是淡水底栖无脊椎动物以及动物寄生虫的重要组成部分。鱼、龟、鳖、蛙、蝾螈、鸟类以及哺乳动物的血液是水蛭的主要食物,因其身体前后两端具有吸盘,同时也可作为这些动物的体外暂时性寄生虫。黄鳝(Monopterus albus),属合鳃目、合鳃科、黄鳝种,是我国重要的淡
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水蛭,属环节动物门(Annelida)、蛭纲(Hirudinea),雌雄同体、异体受精,广泛分布于海洋、湖泊、河流等淡水环境以及潮湿的土地,是淡水底栖无脊椎动物以及动物寄生虫的重要组成部分。鱼、龟、鳖、蛙、蝾螈、鸟类以及哺乳动物的血液是水蛭的主要食物,因其身体前后两端具有吸盘,同时也可作为这些动物的体外暂时性寄生虫。黄鳝(Monopterus albus),属合鳃目、合鳃科、黄鳝种,是我国重要的淡水养殖品种之一,因其具有高蛋白、低脂肪、无肌间刺等特点,深受广大消费者的喜爱。本人在从事黄鳝养殖与繁殖工作过程中发现黄鳝体表有大量水蛭寄生,被水蛭寄生的黄鳝出现体表消瘦、运动缓慢等症状。为有效解决黄鳝养殖过程中遭受水蛭侵袭,提高黄鳝养殖产量,特开展该水蛭物种鉴定、线粒体基因组测序以及黄鳝水蛭病防治等工作,旨在丰富我国水蛭种类,促进我国黄鳝养殖业健康、绿色、高效的发展。(1)本试验通过制作石蜡切片、提取并扩增该水蛭的线粒体细胞色素c氧化酶亚基1(COX 1)、18S核糖体RNA(18S rRNA)基因,得到该水蛭的外部形态学相关数据、内部器官构造以及相关基因片段。通过分析该水蛭的外部形态学数据以及相关分子生物学信息,并结合物种命名规则,我们将该水蛭命名为Hemiclepsis yangtzenensis。(2)本试验通过对该水蛭线粒体基因组测序、注释、上传至GenBank,并结合NCBI上已完成的吻蛭目、无吻蛭目水蛭线粒体全基因组比较、分析,结果如下:该水蛭线粒体基因组序列经注释后提交GenBank(登录号:MN106285),线粒体基因组序列全长为14984bp,共编码37个基因,即22个tRNA基因、2个rRNA基因和13个蛋白编码基因。该水蛭4种碱基百分含量相差较大,其碱基组成为A(35.12%)、G(12.09%)、C(15.04%)和 T(37.66%),A+T 含量(72.87%)高于 G+C 含量(27.13%)。以ATG作为起始密码子的有12个蛋白质编码基因(COX1、COX2、ATP8、NAD6、CYTB、ATP6、NAD5、NAD4L、NAD4、NAD1、NAD3、NAD2),COX3基因以TTG作为起始密码子。有7个蛋白质编码基因(COX1、COX3、NAD6、CYTB、ATP6、NAD4L、NAD2)以TAA作为终止密码子,一个蛋白质编码基因(NAD3)以TAG为终止密码子,其余5个蛋白质编码基因(COX 2、ATP8、NAD5、NAD4、NAD1)是不完全的终止密码子。13个蛋白编码基因共翻译3683个氨基酸。与现阶段已公布的吻蛭目水蛭线粒体编码蛋白基因相比,该水蛭的COX1、COX2、CYTB和NAD1基因相对保守,ATP8、NAD6和NAD2基因变异较大。其中NAD2基因变异程度最大。与大多数水蛭线粒体基因组类似,该水蛭线粒体也包含22个tRNA,其序列长度从59 bp到70 bp不等,tRNA基因序列的总长度达到了 1407 bp。22个tRNA基因中,有 2 个 tRNA-Ser(UCN,AGN)和 2 个 tRNA-Leu(UUR,CUN);在结构上,该水蛭tRNA具有较多变异,G-T错配较多,除tRNA-Gln缺失一环外,其余皆为典型的三叶草型二级结构。此外,该水蛭线粒体基因组共有6个非编码区,总长度为623 bp,基因重叠区共有13处,总长度为83 bp。(3)本试验通过使用硫酸铜、高锰酸钾、复合碘以及生石灰等4种药物对该水蛭进行96 h急性攻毒实验,得出该水蛭的安全浓度、96 h全部致死最小浓度,并使用96 h全部致死最小浓度对健康黄鳝进行攻毒试验,与此同时结合国家环保总局发布的毒性分类标准对这4种药物的毒性大小进行评判,结果如下:硫酸铜、生石灰、高锰酸钾及复合碘对该水蛭的24 h半致死质量浓度分别为1.49、34.67、15.08、13.56 mg/L,48 h 半致死质量浓度为 1.16、32.36、14.54、11.64 mg/L,72 h半致死质量浓度分别为0.95、29.40、13.50、10.07 mg/L,96 h半致死质量浓度分别为0.86、27.97、13.09、9.08 mg/L。其安全质量浓度依次为:0.21、8.46、4.06、2.57 mg/L。此外,用4种药物96h最低全部致死浓度对健康黄鳝进行攻毒试验,结果表明,1.58 mg/L的硫酸铜、35.48 mg/L的生石灰、15.84 mg/L的高锰酸钾以及14.13 mg/L的复合碘均对黄鳝存活无明显影响。结合国家环保总局发布的毒性分类标准(水生生物监测手册),硫酸铜属高毒,复合碘属中毒,生石灰和高锰酸钾为弱毒。这4种药物对水蛭的毒性依次为硫酸铜>复合碘>高锰酸钾>生石灰。
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