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中药复方扶正排毒片是彭勃教授等艾滋病防治专家在长期临床实践中总结出来的经验方,研究已表明扶正排毒片水提物在体外具有抗HIV作用,该方在对河南省艾滋病高发地区HIV感染者的干预治疗中也体现了较好的临床应用基础,然而到目前为止,该方抗HIV作用的分子机制仍不清楚。国外最新研究表明晚期炎症介质HMGB1可通过与其受体RAGE的相互作用增强HIV在宿主细胞内的复制,激活处于潜伏状态的HIV,从而加速病毒感染,已成为艾滋病治疗研究中的一个新靶点。此外,HMGB1和RAGE结合后促使免疫细胞释放炎症细胞因子,释放的细胞因子参与并调控HIV复制和机会性感染的发生,其中IL-6由于其在HIV感染病理损伤中的重要作用己成为最近研究的热点。
目的:构建HMGB1和RAGE体外配受体结合模型,并利用此模型观察扶正排毒片对HMGB1和RAGE结合的影响,并探讨扶正排毒片对其下游细胞因子释放的影响,从而揭示扶正排毒片的抗HIV作用机制。
方法:①通过原核表达和纯化制备重组蛋白HMGB1和sRAGE(RAGE胞外段,含配体结合部位),构建HMGB1和sRAGE的配受体结合模型,并利用此模型观察扶正排毒片水提物对HMGB1和RAGE结合的影响;②采用Ficoll密度梯度离心法分离人PBMCs,然后分别采用MTT和ELISA方法观察扶正排毒片水提物对HMGB1刺激下人PBMCs细胞活力和IL-6水平变化的影响。 结果显示:
①利用制备的重组蛋白所构建的HMGB1和sRAGE配受体结合模型稳定性强、特异性高;利用此模型发现扶正排毒片水提物在1μg/mL到100μg/mL浓度范围内可显著抑制HMGB1和sRAGE的结合;
②扶正排毒片水提物和HMGB1对人PBMCs的细胞活力均没有显著影响(P>0.05);扶正排毒片水提物在浓度为5μg/mL和10μg/mL时可抑制HMGB1刺激下PBMCs中IL-6水平的上调(P<0.05)。
结论提示:扶正排毒片的抗HIV作用部分是通过抑制HMGB1和其受体RAGE的结合以及下游细胞因子IL-6的释放而实现的。