香榧幼胚生物学特性与体细胞胚胎发生的初步研究

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本研究以香榧幼胚胚为外植体,研究了基本培养基、复合添加物、碳源以及植物生长调节物质对愈伤组织形成的影响,筛选出胚性愈伤组织诱导和增殖的适宜条件,并初步进行了体细胞胚的诱导与萌发试验。同时对香榧胚的胚发育特性进行了初步研究。试验结果具体如下:1. Schenk and Hildebrandt (SH)是最佳基本培养基,碳源以3%的蔗糖最优,在SH中添加谷氨酰胺,愈伤组织诱导率显著高于其他处理,达50.8%;低浓度的NAA或2,4-D能够促进愈伤组织的诱导,NAA的促进作用比2,4-D明显,当NAA的浓度为0.1mg/L时,愈伤诱导率显著高于其他处理;胚性愈伤组织的诱导和增殖均以0.05mg/LNAA的效果最好;SH培养基中添加ABA和PEG6000后,胚性愈伤组织可诱导产生体胚,体胚转到1/2SH培养基上,1200lx光照下的萌发效果比黑暗条件下好。2.香榧胚发育经历多胚时期、胚胎选择时期和优势胚完全发育等3个时期。优势胚的发育经历了球形胚、棒状胚、心形胚、鱼雷胚4个阶段。香榧幼胚不同种类内源激素(ABA,IAA,ZR和GA)变化较复杂,GA/ABA与ABA/(IAA+ZR+GA)的比值变化呈现规律变化。香榧胚性愈伤组织发生与幼胚的发育阶段密切相关,不同胚龄幼胚脱分化为胚性愈伤组织的能力存在显著性差异。7月8日采集的幼胚最为敏感,胚性愈伤组织形成率达70.4%;随着胚龄的增大,幼胚胚性感受能力逐渐降低。不同胚龄香榧幼胚形成胚性愈伤组织的方式和部位也不同。7月2日至7月15日采集的香榧幼胚在适宜的培养条件下,易于在整个胚体或胚体头部直接形成胚性愈伤组织;较晚采集的幼胚经2-3次继代后,多在下胚轴或胚柄处形成胚性愈伤组织。香榧幼胚不同部位形成的胚性愈伤组织的增殖速度依次为,整个胚体>胚体头部>胚柄处。
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