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目的:阐明原发性血小板增多症(essentialthrombocythemia,ET)患者骨髓微环境的特异性变化,探究变化的分子机制,为ET的发病机制研究和靶向微环境的治疗提供理论依据。方法:体外分离、扩增健康供者(healthy donors,HDs)和JAK2V617F突变阳性ET患者来源的骨髓间充质基质细胞(mesenchymal stromal cells,MSCs),根据国际细胞治疗协会制定的多能间充质基质细胞的鉴定标准进行鉴定,[1]二代测序联合GO(Gene Ontology),KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析和GSEA(Gene Set Enrichment Analysis)在转录组层面对正常供者来源和JAK2V617F突变阳性的ET患者来源的MSCs进行差异研究,以转录组差异研究为基础,进行MSCs功能的比较性研究,主要包括细胞增殖检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测MSCs增殖,膜联蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(Propidiumiodide,PI)染色检测MSCs凋亡,β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)染色检测MSCs衰老,油红O,茜素红和阿尔新蓝染色检测MSCs分化,碘化丙啶染色检测MSCs周期,长期培养体系检测MSCs造血支持能力,酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)检测骨髓提取液和条件培养基中造血相关细胞因子水平,细胞增殖检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测骨髓中CD4阳性T细胞增殖,流式细胞术检测骨髓中CD4阳性T细胞活性和T辅助细胞1/2/17(T helper cell 1/2/17,Thl/2/17)和调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)亚群细胞数,酶联免疫吸附测定法检测骨髓提取液和条件培养基中炎症相关细胞因子水平,共培养体系检测MSCs免疫调节能力,免疫组织化学染色法检测骨髓中交感神经纤维和施万细胞等;在转录组和功能差异研究的基础上,利用基因过表达和敲低技术联合信号通路抑制剂进一步挖掘上述差异产生的分子机制。结果:(1)和正常供者来源的MSCs相比,JAK2V617F阳性ET患者来源的MSCs存在转录组特异性改变;(2)JAK2V617F阳性ET患者来源的MSCs增殖增强,凋亡和衰老减弱,分化为脂肪细胞和成骨细胞的能力减弱;(3)JAK2V617F阳性ET患者来源的MSCs对CD4阳性T细胞的增殖和活化以及炎症因子可溶性型CD40配体(soluble CD40 ligand,sCD40L)分泌的抑制作用减弱,对免疫抑制性Th2细胞的形成和抗炎因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)分泌的诱导作用减弱;(4)JAK2V617F阳性ET患者来源的MSCs对正常造血的支持能力减弱;(5)WDR4分子在JAK2V617F阳性ET患者来源的MSCs中特异性低表达,导致MSCs的增殖增强,衰老和分化减弱;(6)WDR4-IL-6信号轴激活减弱导致JAK2V617F阳性ET患者来源的MSCs对正常造血的支持能力受损;(7)WDR4低表达导致ERK-GSK3β-CREB信号通路蛋白磷酸化水平降低,进而引起JAK2V617F阳性ET患者来源的MSCs细胞内外IL-6减少;(8)JAK2V617F阳性ET患者骨髓造血微环境中存在交感神经损伤和神经毒性细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)异常升高。结论:JAK2V617F阳性ET患者的骨髓造血微环境存在广泛的异常改变,包括MSCs功能缺陷,免疫失衡和交感神经损伤。MSCs中低表达的WDR4导致的细胞内外IL-6水平降低可能是JAK2V617F阳性ET患者来源的MSCs支持正常造血功能受损的关键分子机制。目的:探讨中国原发性血小板增多症(essentialthrombocythemia,ET)患者的症状负荷与临床特征(突变状态,治疗方案,性别差异)的关系,为治疗和预后判断提供依据。方法:使用骨髓增殖性肿瘤总症状评估量表(MPN-SAF-TSS或MPN10)对173例中国ET患者进行现场和网络症状评估,根据突变状态将患者分为JAK2V617F突变阳性组,CALR突变阳性组,非三阴性组,根据治疗方案分为羟基脲(47)治疗组和干扰素(IFN-ca)治疗组,根据性别分为男性患者组和女性患者,结合症状评分回顾性分析患者的病例资料。结果:各组患者均表现出由低至高的症状负荷,Hu治疗组患者症状负荷最高(总症状评分[TSS],14.7;范围,7.6-14.7)。与对照组相比,JAK2V617F阳性、Hu治疗和女性患者组具有更高的总症状和独立症状评分。CALR阳性和IFN-α治疗组的总症状和独立症状得分均低于缺乏相应特征的对照组。“JAK2V617F阳性”、“Hu治疗后”和“女性患者”这三个特征的累加会导致更严重的症状负荷。结论:中国ET患者的症状负荷与患者的突变状态、治疗选择和性别差异显著相关,制定治疗方案和进行预后判断时应综合考虑患者的症状负荷和相关临床特征。