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目的:本研究以逼尿肌过度活动（Detrusor Over-activity,DO）模型大鼠为研究对象,动态观察（针刺治疗后2小时、24小时、48小时、72小时）针刺的效应。并且借助逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）、蛋白免疫印迹反应（Western blot,Wb）、钙离子成像等技术,观察针刺对膀胱Cajal间质细胞（Interstitial cells of Cajal,ICCs）细胞起搏电流通道超极化激活环核苷酸门控阳离子通道（Hyperpolarization activates cyclic nucleotidegated cation channels,HCN）相关亚型的影响以及ICCs细胞内钙离子震荡特性的影响,结合尿动力变化和肌条牵拉实验,揭示针刺调节逼尿肌兴奋性的肌源性机制,阐述针刺在调节逼尿肌过度活动中的相关效应和机理。方法:将SPF级雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组和药物组。采用环磷酰胺（Cyclophosphamide,CYP）腹腔注射方法建立大鼠逼尿肌过度活动模型。模型组:给予逼尿肌过度活动造模处理;针刺组:DO造模成功后,同时给予针刺次髎、会阳穴,电针连续波（频率30 Hz）20分钟;每天针刺治疗一次,连续三天;药物组:DO造模成功后,予灌胃ICCs细胞特异阻断剂Glivec（甲磺酸伊马替尼）,每天治疗一次,连续三天。以上各组均进行尿动力测定以及膀胱肌条牵拉实验。为了进行动态观察针刺效应,每组又随机分为4个观察点亚组（对应不同观察点:针刺治疗后2小时,24小时,48小时,72小时）,每个亚组10只大鼠。采用加拿大Laboria尿动力分析仪进行膀胱尿动力测定;离体膀胱肌条牵拉实验观察逼尿肌收缩特性;RT-PCR、Wb法测定膀胱ICCs细胞HCN1-4亚型mRNA和蛋白表达;钙离子成像技术检测膀胱ICCs细胞胞内钙离子震荡特征。结果:1、模型评价:采用CYP制备DO模型成功,主要尿动力表现为:储尿期膀胱逼尿肌可见不自主的收缩波,表现为期向性的收缩,并且模型组膀胱的有效容量明显缩小,储尿期时间明显缩短。2、尿动力特征:组间比较,在2小时、24小时、48小时、72小时观察点上,模型组大鼠膀胱有效容量明显小于假手术组（P<0.05）,且其储尿期时间较假手术组大鼠明显缩短（P<0.05）,符合DO模型状态;与模型组相比,针刺组和药物组在四个观察点上的膀胱有效容量均显著增加（P<0.05）,储尿期时间明显延长（P<0.05）,但针刺组和药物组之间没有差异性,说明针刺和药物均能有效改善逼尿肌不稳定状态;同时也发现,在四个观察点上,24小时观察点模型组的排尿压力低于假手术组（P<0.05）,针刺组和药物组的排尿压力也低于假手术组（P<0.05）,和模型组比较,有升高趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。组内比较,假手术组各个观察点之间的膀胱有效容量及储尿时间均无明显变化（P>0.05）,模型组各个观察点之间的膀胱有效容量及储尿时间均无明显变化（P>0.05）,说明模型稳定;针刺组、药物组分别进行组内比较,膀胱有效容量增加及储尿时间延长的效应在24小时观察点时最佳,但各个观察点之间的差异均无统计学意义（P>0.05）,说明针刺、药物（甲磺酸伊马替尼）对造模大鼠膀胱有效容量增加和储尿时间延长的效果较为持续,并可能在24小时观察点上最佳。3、膀胱离体肌条收缩特性:组间比较,在四个观察点中,24小时观察点上模型组大鼠膀胱肌条收缩频率较假手术组升高（P<0.05）、收缩幅度降低（P<0.05）,且与模型组比较,针刺组膀胱肌条收缩频率降低（P<0.05）,收缩幅度增高（P<0.05）,药物组仅可见膀胱肌条收缩频率降低（P<0.05）;在2小时、48小时、72小时观察点上,各组肌条的收缩频率和幅度组间差异均无统计学意义（P>0.05）。组内比较,假手术组各个观察点之间的肌条收缩频率和幅度均无明显变化（P>0.05）;模型组各个观察点之间的肌条收缩频率和幅度均无明显变化（P>0.05）;针刺组肌条收缩频率在24小时观察点较其他3个观察点低,但各个观察点之间差异无统计学意义（P>0.05）,收缩幅度在24小时观察点上明显高于2小时观察点（P<0.05）,体现24小时观察点优势;药物组肌条收缩频率在24小时观察点较其他3个观察点低,收缩幅度在24小时观察点较其他3个观察点高,但各个观察点之间差异无统计学意义（P>0.05）,体现24小时观察点优势。4、膀胱ICCs细胞HCN各亚型变化:组间比较,在四个观察点中,只在24小时观察点上,模型组大鼠膀胱ICCs的HCN1和HCN2的信使核糖核酸（Messenger RNA,mRNA）和蛋白表达均高于假手术组大鼠（P<0.05）,与模型组比较,针刺组和药物组均可见HCN1和HCN2的mRNA和蛋白表达降低（P<0.05）,在2小时、48小时、72小时观察点上,各组膀胱ICCs的HCN1和HCN2的mRNA和蛋白表达组间差异无统计学意义（P>0.05）,HCN3、HCN4所有观察点上组间差异无统计意义（P>0.05）。组内比较,假手术组各个观察点上HCN1和HCN2的mRNA表达组内均无明显变化（P>0.05）,模型组各个观察点上HCN1和HCN2的mRNA表达组内均无明显变化（P>0.05）,针刺组各个观察点上HCN1和HCN2的mRNA表达组内均无明显变化（P>0.05）,药物组可见HCN1 mRNA在48小时观察点上明显高于24小时（P>0.05）,而HCN2 mRNA组内差异无统计学意义（P>0.05）,HCN3和HCN4的mRNA各组四个观察点之间差异均无统计学意义（P>0.05）。5、24小时观察点上膀胱ICCs细胞内钙离子震荡特性:模型组大鼠膀胱ICCs细胞内钙离子震荡频率较假手术组明显升高（P<0.0083）、钙离子震荡幅度明显增加（P<0.0083）,与模型组比较,针刺组和药物组均可见膀胱ICCs内钙离子震荡频率降低（P<0.0083）、幅度下降（P<0.0083）,说明针刺和药物治疗对降低ICCs兴奋性均有效。模型大鼠膀胱ICCs内钙离子震荡波宽较假手术组增加（P<0.05）,但与模型组比较,针刺组、药物组差异均无统计学意义（P>0.05）,说明针刺和药物对于调节ICCs细胞内钙离子震荡波宽无影响。结论:1、针刺干预后2小时、24小时、48小时、72小时后,DO大鼠的膀胱容量增加、膀胱储尿期时间延长。2、针刺干预后24小时,DO大鼠的膀胱逼尿肌肌条收缩频率明显降低、收缩幅度明显升高。说明针刺对逼尿肌的最佳效应体现在针刺后24小时。3、针刺干预后24小时,DO大鼠膀胱ICCs细胞HCN1和HCN2的mRNA和蛋白的表达明显降低,同时膀胱ICCs细胞内钙离子震荡的频率和幅度均降低,说明针刺可通过抑制膀胱ICCs细胞起搏通道HCN的表达及ICCs细胞内钙离子震荡特性,从而调节逼尿肌过度活动。