目的:泌乳素(PRL)是一种由垂体前叶分泌的多肽类激素,在生殖和哺乳中起着重要作用,近年来,研究发现PRL与糖脂代谢密切相关。然而关于其对肝脏脂代谢的作用尚未见报道,因而本文通过临床研究、动物实验以及细胞实验,探讨了 PRL及其受体对非酒精性脂肪肝(NAFLD)和肝脏脂代谢的影响及其作用机制。方法:选取2015年9月至2017年1月在我院经腹部超声诊断的454例NAFLD患者(男241例,女213例)和对照组405例(男200例,女205例),采用化学发光免疫分析法检测血清PRL水平,同时检测其他代谢相关指标。纳入2017年3月-6月在我院普外科接受代谢外科手术的患者。在手术过程中留取肝脏组织,经苏木精-伊红染色后由肝脏病理医生对这些患者进行NAFLD的诊断和评分。共纳入了 55名女性(44名NAFLD患者和11名年龄匹配的非NAFLD患者)以及30名男性NAFLD患者,根据其肝脏病理结果,NAFLD患者又进一步分为轻至中度NAFLD和重度NAFLD。测定这些受试对象的血清PRL浓度。此外,用荧光定量PCR和免疫染色的方法分别检测了人体肝脏组织中PRL受体(PRLR)的基因和蛋白水平的表达,并检测了肝脏脂质合成、氧化和摄取的重要分子的基因。动物水平,我们检测了 ob/ob、db/db小鼠及高脂饮食诱导的小鼠肝脏PRLR水平,并通过尾静脉注射含有PRLR过表达的腺相关病毒,观察其对高脂饮食诱导的小鼠肝脏脂质沉积的影响;在体外,我们利用游离脂肪酸(FFA)诱导的HepG2细胞来研究PRL/PRLR在肝脏脂质代谢中的调控机制。采用甘油三酯试剂盒及Western blot的方法来检测PRL干预后对FFA诱导的HepG2细胞甘油三酯及相关蛋白表达水平的影响,进一步用含有PRLR过表达的腺病毒,PRLR小干扰RNA(siRNA)的质粒,以及脂肪酸转位酶(FAT/CD36)过表达的质粒转染FFA诱导的HepG2细胞。非正态分布数据的中位数和四分位数间距(IQR)分析,两组或多组间的非正态分布数据采用Mann Whitney或Kruskal Wallis分析分类数据用卡方检验或Fisher精确检验进行分析。PRL与NAFLD之间的风险评估通过多因素Logistic回归分析,并校正了年龄、体重指数(BMI)、HbA1c、稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),是否存在糖尿病和糖耐量受损(IGR)以及PRL。人体肝脏PRLR基因表达和肝脏脂质代谢相关基因的相关性分析采用Spearman分析。细胞实验的统计分析采用r检验或单因素方差分析(ANOVA),P<0.05认为差异具有统计学意义。结果:超声诊断为NAFLD的患者血清PRL水平(男性:7.9[5.9-10.3]μg/L;女性:8.7[6.1-12.4]μg/L)显著低于无 NAFLD 患者(男性:9.1[6.8-13.0]μg/L,P= 0.002;女性:11.6[8.2-16.1]μg/L,P<0.001);亚组分析显示,在糖耐量正常、T2DM和IGR、超重和肥胖、多囊卵巢综合征、绝经前、绝经后女性中,与非NAFLD患者相比,NAFLD患者均表现出显著降低的PRL浓度。基于PRL浓度的四分位数将受试者分为四组,在男性及女中,NAFLD的患病率均随PRL 的升高而逐渐下降(男性:Q1:64.9%,Q2:59.5%,Q3:53.2%,Q4:42.7%,P=0.007;女性:Q1:66.7%,Q2:59.4%,Q3:49%,Q4:28.2%,P<0.001)。在校正了年龄、性别、BMI、HbA1c、HOMA-IR、是否存在糖尿病和IGR后,与PRL最低四分位数组相比,PRL最高四分位数组的人群发生NAFLD的风险显著降低,比值比(95%可信区间)值分别为:男性0.48(0.23,0.99)和女性0.36(0.13,0.97)。经肝脏活检诊断为NAFLD的女性患者血清PRL水平(9.6[6.7-14.1]μg/1)也显著低于无NAFLD(15.8[12.1-18.2]μg/l,P=0.003)者;同时,重度脂肪肝患者的PRL水平显著低于轻度至中度脂肪肝(男性:8.3[5.4-9.5]μg/l vs 9.7[7.1-12.3]μg/1,P= 0.031)和(女性:8.5[4.2-10.6]μg/lvs 9.8[8.2-15.7]μg/l,P=0.027)。此外qRT-PCR结果显示,人体肝脏PRLR基因表达在NAFLD患者显著低于无NAFLD者,并且和CD36基因表达呈负相关。Westernblot结果显示,与对照组小鼠相比,ob/ob、db/db小鼠及高脂饮食诱导的小鼠肝脏PRLR水平明显下调,通过尾静脉注射含有PRLR过表达的腺相关病毒后,肝脏油红O染色显示其脂质含量较高脂组明显减少;在高脂诱导的HepG2细胞,PRL刺激和PRLR过表达能够增加信号转导与转录激活因子5(STAT5)的磷酸化水平,随后降低CD36的蛋白表达降低,以及细胞内甘油三酯(TG)的含量。而PRLR过表达对肝细胞脂质合成和氧化的关键基因并无明显影响。此外,使用含有PRLR小干扰RNA或CD36过表达的质粒转染HepG2细胞后,PRL减少脂质含量的作用被明显减弱。结论:我们首次报道了,较低水平的血清PRL和PRLR与NAFLD的发生有关。PRL/PRLR信号通路活化后可以激活STAT5的磷酸化,从而抑制肝脏脂质摄取的关键分子CD36的表达,并减少肝细胞内甘油三酯的沉积。我们体内和体外实验结果揭示了中枢神经系统和肝脏之间的新的相互作用,PRL/PRLR通路可能作为治疗NAFLD的新的潜在靶点。