【摘 要】
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目的:胃癌（Gastric cancer）在过去50年中,胃癌的发病率和死亡率在全球范围内有所下降,但它仍然是癌症相关死亡的主要原因之一。近几年来,有研究发现,反义LncRNA（antisense lncRNA）在胃癌发生发展中发挥关键作用,然而,LncRNA EPHA1-AS1在胃癌中的作用尚不清楚。在本研究中,旨在阐明LncRNA EPHA1-AS1在胃癌组织和细胞中的表达情况以及相关的生物学
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目的:胃癌（Gastric cancer）在过去50年中,胃癌的发病率和死亡率在全球范围内有所下降,但它仍然是癌症相关死亡的主要原因之一。近几年来,有研究发现,反义LncRNA（antisense lncRNA）在胃癌发生发展中发挥关键作用,然而,LncRNA EPHA1-AS1在胃癌中的作用尚不清楚。在本研究中,旨在阐明LncRNA EPHA1-AS1在胃癌组织和细胞中的表达情况以及相关的生物学功能,并为胃癌新标志物的开发和胃癌靶向治疗提供新的思路和理论基础。方法:1.使用GEPIA数据库,检索EPHA1-AS1在多种癌组织和癌旁组织中的表达情况;使用ENCORI数据库,检索EPHA1-AS1在胃癌（n=375）和正常组织（n=3）中是否差异表达;使用Kmplot数据库分析EPHA1-AS1高表达胃癌患者（n=403）和低表达胃癌患者（n=228）总生存期情况,以及EPHA1-AS1高表达胃癌患者（n=336）和低表达胃癌患者（n=186）无疾病进展生存期情况;基于TCGA数据库,利用GEPIA工具和R语言,分析了胃癌组织中与EPHA1-AS1表达相关的基因及其可能参与的通路;2.依据纳排标准收集了陕西省人民医院2017年5月到2019年5月36对胃癌及其癌旁组织,利用实时荧光定量PCR（quantitative Real-Time PCR,qRT-PCR）检测在胃癌组织及配对癌旁组织的表达情况;结合临床相关资料（年龄、性别、分化程度、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结是否转移）,分析了EPHA1-AS1在胃癌中的表达与临床病理资料和预后的相关性;3.利用qRT-PCR检测胃癌细胞系SNU-1、HGC-27、AGS、KATO-Ⅲ和胃正常上皮细胞（GES-1）的EPHA1-AS1表达情况;合成特异敲减EPHA1-AS1表达的慢病毒,对HGC-27、AGS进行慢病毒敲减,对稳转细胞株进行CCK8细胞增殖实验、集落形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验。结果:1.生物信息学分析结果提示EPHA1-AS1在多种癌组织和癌旁组织中表达有差异;与癌旁对照相比,EPHA1-AS1在胃癌组织中高表达（P=0.02）;EPHA1-AS1的表达水平与胃癌患者总生存期（HR=1.56（1.23-1.98）,P＜0.001）、无疾病进展生存期（HR=1.38（1.06-1.78）,P=0.016）相关;GO和KEGG分析发现,EPHA1-AS1可能参与了激活跨膜转运蛋白活性、电子传递等,且可能在胃癌细胞的代谢、氧化磷酸化等信号通路发挥重要作用。2.本研究收集了36例胃癌患者的癌和癌旁组织,qRT-PCR结果提示EPHA1-AS1在胃癌组织中表达升高,与癌旁组织相比有显著差异（t=2.258,P=0.027）;通过随访,本研究发现高表达EPHA1-AS1的病人无疾病进展生存期较短（HR=2.405,P=0.0388）;进一步分析了EPHA1-AS1的表达水平与胃癌患者的临床病理资料的相关性,发现EPHA1-AS1高表达组和低表达组的浸润深度（P＜0.05）、淋巴结转移（P＜0.05）、TNM分期（P＜0.05）差异有统计学意义,而性别（P=0.699）、年龄（P=0.315）、分化程度（P=0.489）差异无统计学意义。3.本研究进一步利用qRT-PCR检测了EPHA1-AS1在胃癌细胞系（SNU-1、HGC-27、AGS、KATO-Ⅲ）和胃正常上皮细胞（GES-1）的表达水平差异,发现胃癌细胞系EPHA1-AS1表达水平高于胃正常上皮细胞（F=11.67,P＜0.001）;利用慢病毒转染敲减了胃癌细胞AGS和HGC-27中EPHA1-AS1的表达水平;利用CCK8细胞增殖实验、集落形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验发现,与阴性对照细胞相比,敲减EPHA1-AS1的胃癌细胞的生长增殖（P＜0.05）、迁移（P＜0.05）和侵袭（P＜0.05）能力显著下降。结论:LncRNA EPHA1-AS1在胃癌组织及胃癌细胞系中高表达,能够促进胃癌细胞的生长增殖及迁移侵袭能力,可能是胃癌诊疗的潜在靶点。
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