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目的:对本实验室建立的荧光定量分型PCR法的反应条件和反应体系进行优化,并对其进行方法学评价,检验初步临床应用效果,明确重庆地区HBV基因型分布情况。方法:从退火温度、探针引物浓度比方面对荧光定量分型PCR反应进行优化,建立荧光定量PCR的标准曲线,并对该方法的灵敏度、特异性、重复性指标进行初步评价。通过将荧光定量分型PCR法与直接测序法和多重PCR分型法比较,并用TA克隆测序法对检测结果不一致的样本进行验证,对荧光定量分型PCR法进行进一步评价。最后将荧光定量分型PCR法用于检测207份重庆地区HBV感染者的基因型,观察其临床初步应用效果。结果:经过优化后将荧光定量分型PCR法的退火温度定为62°C,探针浓度定为0.3μM,引物浓度定为0.5μM。该分型法的线性范围为10~2-10~9copies/ml,灵敏度高,特异性强,重复性好,具有操作简便、检出快速的优点。在对113份样本进行分型检测中,荧光定量分型PCR和直接测序法检出率100%,多重PCR法检出率94.69%,6份样本未能分型。荧光定量分型PCR和多重PCR的Kappa系数0.915,荧光定量分型PCR和直接测序法的Kappa系数0.742,一致性均较好。对B、C基因型混合感染样本,荧光定量分型PCR法检出28例(24.78%),多重PCR法检出19例(16.81%),直接测序法检出13例(16.81%)。荧光定量分型对基因型混合感染样本的检测灵敏度明显高于直接测序和多重PCR分型法。在对重庆地区HBV基因型分布特征的调查研究中发现,B型127例(61.35%),C型29例(14.01%),BC混合型48例(23.19%),B型为主要基因型, B/C混合型感染率高。C基因型的病毒载量高于B型及BC混合型(P < 0.05),B基因型与BC混合型的病毒载量无统计学差异(P > 0.05)。结论:本实验室建立的荧光定量分型PCR法是一种可靠、高效、快速、简便的HBV基因分型法,尤其对混合基因型感染的检测灵敏度高。此分型方法针对我国主要分布的B、C基因型对HBV进行分型检测,不仅适用于初步的临床快速检测,也适用于在我国开展的大规模流行病学调查,为揭示基因型与临床表现、抗病毒疗效等的相关性提供方法学支持。重庆地区,以B型为主要基因型,B/C基因型混合感染高于以往研究结果。