珊瑚转化型羟基磷灰石(天博)与纯相β-磷酸三钙(Cerasorb)对成骨细胞增殖活性的影响

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目的:通过培养St2细胞,扩增,经矿化诱导,向成骨细胞(OBs)分化,并对矿化诱导后的细胞进行成骨细胞鉴定,然后将成骨细胞扩增培养;将成骨细胞与珊瑚转化型羟磷灰石(天博骨粉,CHA)、纯相β-磷酸三钙(Cerasorb,β-TCP)进行体外复合培养,观察研究CHA、β-TCP对成骨细胞增殖活性的影响。从细胞水平评价CHA、β-TCP两种生物支架材料的生物相容性及对成骨细胞增殖能力,进而为组织工程人工骨支架材料的选择应用提供基础实验依据。方法:1.St2细胞的培养及传代:用培养St2细胞株,获得稳定良好的实验细胞,应用完全DMEM低糖培养基对St2细胞进行传代扩增培养,并进行冻存作为库存细胞。2.St2细胞向成骨细胞分化、鉴定和培养:将生长良好的St2细胞在成骨诱导培养液内常规培养,使St2细胞向成骨细胞分化,然后对诱导后的细胞采用Gomori钙钴法,碱性磷酸酶(ALP)染色,茜素红矿化结节染色,进行成骨细胞的鉴定获得成骨细胞,进行扩增培养。3.分组将成骨细胞接种在CHA、β-TCP支架材料上进行培养。采用体外复合细胞培养,观察成骨细胞分别在CHA和β-TCP上的增殖情况,用直接计数法检测第3、5、7d成骨细胞与CHA、β-TCP接种复合培养的细胞增殖率;再用MTT法分析复合培养第3、5、7d时,CHA、β-TCP对成骨细胞增殖的影响;用PNPP法检测第3、5、7d时,CHA、β-TCP对成骨细胞ALP活性的影响。结果:1.诱导St2细胞向成骨细胞分化,进行成骨细胞的鉴定:Gomori钙钴法,ALP染色后细胞呈强阳性反应胞浆内呈现灰黑色颗粒;茜素红矿化结节染色后矿化结节呈现深红色,结节周围细胞胞浆也呈红染。2.直接计数法检测成骨细胞与CHA、β-TCP接种复合培养的细胞增殖情况:2.1 CHA、β-TCP表面的成骨细胞随着培养时间的延长,细胞数量逐渐增加,CHA、β-TCP均具有较好的细胞相容性。2.2成骨细胞在CHA表面的增殖速度较β-TCP快。3.MTT法检测β-TCP、CHA对成骨细胞增殖及活力显示:成骨细胞在CHA表面的增殖活性高于β-TCP。4. PNPP法检测各组ALP活性结果显示:OBs+CHA组ALP活性表达高于OBs+β-TCP组(p<0.05)。结论:1.成骨细胞在CHA上增殖速度比在β-TCP上的速度快,更适宜作为骨组织工程支架材料。2.通过矿化诱导获得的成骨细胞可较好的与β-TCP、CHA在体外复合培养,并能够进行快速的增殖。3.运用细胞直接计数法测定细胞增殖率,该法可直接反映细胞在材料表面的生长情况,可以较好地评价β-TCP、CHA两种材料细胞相容性;4..β-TCP、CHA均具有良好的生物相容性。
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