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目的:冠状动脉粥样硬化性心脏病,是动脉粥样硬化造成冠状动脉血管腔狭窄或阻塞,致冠状动脉血供相对或者绝对不足而引起的心肌缺血、缺氧改变,其机制极其复杂,平滑肌细胞异常增殖是其主要原因之一[1],其中氧化型低密度脂蛋白可以引起内皮损伤并释放多种炎性介质,促进单核细胞转化为巨噬细胞吞噬脂质形成脂质坏死核心,而增殖的平滑肌细胞包围脂质核心成为平滑肌纤维帽促进VSMC（血管平滑肌细胞）的增殖包裹脂质坏死核心,最终形成动脉粥样斑块堵塞血管腔造成心肌缺血、缺氧或坏死[3-5]。有研究认为[6-8],雌激素对动脉粥样斑块有干预作用,但因其致癌、致栓等风险使其运用受限。近年来研究发现[10],植物雌激素,诸如淫羊藿苷、黄芩苷等可以模拟雌激素作用,且副作用少,开发类似植物雌激素成为需求。本课题前期研究显示二仙入血成分中含有多种植物雌激素并且其可以激活GPER30（G蛋白偶联雌激素相关受体）及下游ERK1/2、AKT等信号通路减轻心肌再灌注损伤。基于此前期研究,本实验旨在细胞水平探究二仙含药血清对氧化型低密度脂蛋白诱导的冠状动脉平滑肌细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法:1.细胞培养:应用大鼠原代冠状动脉平滑肌细胞,置于完全培养基中培养,实验细胞为第4-6代细胞（均处于对数生长期）。2.实验步骤:首先给予不同浓度Ox-LDL进行诱导细胞,并行CCK-8筛选出最佳浓度为50mg/L Ox-LD;并筛选出10%二仙含药血清为最佳浓度;正式实验分组为9组:正常细胞组、模型组（Ox-LDL）、阳性对照组（17-β雌二醇）、阴性对照组（大鼠阴性血清）、二仙含药血清组、ICI182780组、G15组、二仙含药血清+ICI182780组、二仙含药血清+G15组,倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术（Flou-3）测定钙离子浓度,荧光定量PCR检测细胞中GPER30、ERK1/2、AKT m RNA表达,ELISA、Western blot法测定GPER30、ERK1/2、AKT蛋白表达。结果:1.倒置显微镜观察二仙含药血清对Ox-LDL诱导的平滑肌细胞形态学影响与正常RCSMCs比较,在Ox-LDL的作用下RCSMCs细胞胞体增大,由梭形变为不规则形,而二仙含药血清干预后细胞胞体变小,加入ICI182780及G15后二仙含药血清这一作用减弱。2.CCK-8法检测二仙含药血清对Ox-LDL诱导的平滑肌细胞增殖活性的影响与正常细胞比较,Ox-LDL明显促进细胞增殖,而二仙含药血清干预后抑制了Ox-LDL对细胞的促进作用,并且二仙含药血清的这一作用可以被ICI182780及G15阻断。3.流式细胞术检测二仙含药血清对Ox-LDL诱导的平滑肌细胞中钙离子水平的影响与模型组比较,二仙含药血清组明显降低了RCSMCs钙离子浓度;与二仙含药血清组比较,二仙含药血清+ICI182780组及二仙含药血清+G15组均阻断了二仙含药血清对平滑肌增殖的抑制作用。4.荧光PCR法检测二仙含药血清对Ox-LDL诱导的平滑肌细胞GPER30、ERK1/2、AKT m RNA表达水平的影响与模型组比较,二仙含药血清组GPER30 m RNA表达明显升高,而对ERK1/2、AKT m RNA表达无明显影响;与二仙含药血清组比较,二仙含药血清+ICI182780组、二仙含药血清+G15组GPER30 m RNA表达明显减少,而ERK1/2、AKT m RNA表达分别未见明显变化;说明在基因水平上二仙含药血清促进了GPER30基因表达而对ERK1/2、AKT无明显作用,且二仙含药血清的这一作用可以被ICI182780及G15阻断。5.ELISA法检测二仙含药血清对Ox-LDL诱导的平滑肌细胞GPER30、ERK1/2、AKT等蛋白表达的影响与模型组比较,二仙含药血清组GPER30蛋白表达水平明显升高,而ERK1/2、AKT蛋白表达水平明显降低;与二仙含药血清组比较,二仙含药血清+ICI182780组、二仙含药血清+G15组GPER30蛋白表达水平均明显下降,而ERK1/2、AKT蛋白表达水平均明显升高;说明在蛋白水平上二仙含药血清明显促进了GPER30蛋白表达而抑制ERK1/2、AKT蛋白表达,且二仙的这一作用可以被ICI182780及G15阻断。6.Western blot法检测二仙含药血清对Ox-LDL诱导的平滑肌细胞GPER30、ERK1/2、AKT等蛋白表达的影响与模型组比较,二仙含药血清组GPER30蛋白表达水平明显升高,而ERK1/2、AKT蛋白表达水平明显降低;与二仙含药血清组比较,二仙含药血清+ICI182780组、二仙含药血清+G15组GPER30蛋白表达水平均明显下降,而ERK1/2、AKT蛋白表达水平均明显升高;说明在蛋白水平上二仙含药血清明显促进了GPER30蛋白表达而抑制ERK1/2、AKT蛋白表达,且二仙的这一作用可以被ICI182780及G15阻断。结论:二仙含药血清抑制由Ox-LDL诱导的平滑肌细胞增殖,其机制是多靶点、多通路,与GPER30和雌激素经典受体ER均有关联,同时二仙含药血清可以降低平滑肌细胞内钙离子水平促使平滑肌舒张。