论文部分内容阅读
背景:脱发是如今较为普遍的现象,以雄激素性脱发(Androgenetic Alopecia,AGA)最为常见。目前,脱发的治疗主要以服用非那雄胺和局部涂抹米诺地尔为主,尽管这些方法可以部分改善脱发,但仍存在用药效果不明确、需长期依赖用药及不良反应发生率较高等问题。富血小板血浆(Platelet-Rich Plasma,PRP)是从全血离心分离的富含高浓度血小板的血液成分,裂解后能释放大量生长因子。已有研究表明注射PRP能够刺激毛发再生,但注射引发的感染、出血、局部红斑和恐惧让患者的接受度大为降低。微针(Microneedles,MN)是近年来新型的透皮给药方式,因其能够穿透皮肤角质层不引起明显疼痛,被广泛用于口服或注射给药的代替方式。微针疗法是通过微创的方式触发伤口愈合机制来刺激毛发再生。本研究通过将PRP裂解液与透明质酸复合制备微针,探究二者结合使用对促进毛发再生的作用。目的:(1)通过筛选、优化微针工艺确定微针制备的条件;(2)探究制备富血小板血浆裂解液(Platelet-rich plasma lysate,PL)复合透明质酸微针(PL-HA微针)的可行性;(3)探究负载PL的微针对于毛发再生的效果。方法:本文研究主要分为两大部分,第一部分为微针制备工艺的筛选与优化。采用固化成型法制备聚二甲基硅氧烷(PDMS)模具;通过筛选背衬材料及针体浓度、优化制备工艺以及探究保存条件等确定微针的制备条件。采用反复冻融法制备富血小板血浆裂解液(PL)并检测PL中血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度。采用确定的微针制备条件制备了负载PL复合透明质酸微针,考察了微针针形、针高、机械性能、透皮性能等,并检测了 PL-HA微针中VEGF、PDGF-BB和TGF-β1的含量及保存稳定性。第二部分为PL-HA微针的应用研究。使用C57BL/6J小鼠,通过局部涂抹雄激素的方法建立脱发模型,随机将32只小鼠分为4组:(1)PL组,脱发后每天在脱发部位涂抹雄激素,在第1、4、7、10、13天给予PL-HA微针治疗;(2)HA组,除采用不含PL的HA微针治疗外,模型建立与治疗方式均同PL组;(3)米诺地尔组,模型建立同PL组,治疗方式为每天在脱发区域涂抹米诺地尔,直至实验结束;(4)对照组,除每天在脱发部位涂抹雄激素外,不给予任何处理。实时记录毛发生长情况,于实验结束后计算再生毛发覆盖率、定性观察毛囊生长情况及定量检测细胞增殖情况和新生血管密度等指标。结果:制备所得PDMS模具的阵列为20×20,底座为300μm,针尖距为700μm。筛选最优针体浓度为30mg/mL HA,最优背衬材料为300mg/mL PVP。两步制备法所得微针成针率达100%,且在湿度低于20%的情况下保存良好。在不影响针形及机械性能的情况下,成功制备具有生物活性的PL-HA微针。其阵列整齐,针形完好,具有足够的机械强度刺穿皮肤,其内PDGF-BB含量为18.63±0.91(ng/mL)、TGF-β1含量为 64.24±5.75(ng/mL)、VEGF 含量为 813.50±82.51(pg/mL)。将其应用于脱发小鼠,在第10天能发生色素沉着,第14天有大量Ki67的阳性表达,第20天有大量CD31的阳性表达,与药物米诺地尔相比,能快速诱导毛发再生。结论:(1)成功制备PDMS模具。微针最适针体浓度为30mg/mLHA,背衬材料为300mg/mLPVP,采用两步制备法作为微针制备的方法。(2)PL复合HA微针具有良好的形貌与机械性能,且能较好的保持生长因子活性。(3)PL-HA微针应用于小鼠脱发部位,与临床一线药物米诺地尔的应用(每天1次,一共20次)相比,在给药次数更低,给药频率更慢(每3天1次,一共5次)的基础上,PL-HA微针诱导毛发再生的作用与米诺地尔相当。