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目的：前期研究表明,阳虚质存在肠道菌群失衡及能量代谢、脂代谢、免疫功能的紊乱。但是阳虚质肠道微环境具体发生了怎样的改变,目前还没有一个完整准确的认识。课题通过对阳虚质和平和质的粪便样品进行微生物分子生态学研究,得出平和质与阳虚质的菌群多样性和丰度指数特点。结合多变量统计学分析得到反映阳虚质特征的肠道菌群标志物,为中医体质分类提供客观依据,对于开展基于肠道菌群的个体化诊疗与预防具有重要意义。获得阳虚质肠道菌群标志物是本项目拟解决的一个关键科学问题。肠道菌群结构将会对其宿主代谢起着重要的作用,为从微生物层面揭示阳虚体质的特征,本项目采用微生物分子生态学技术,结合多变量统计方法,筛选、鉴定特征标志物。方法：纳入北京地区平和质、阳虚质的单一体质类型各30例,要求常规体检正常,无明确疾病诊断,采样前一个月内均无应用抗生素、胃肠动力药、微生态调节剂史。确保两组性别、年龄等基线资料可比。采集自然排出的新鲜粪便,立即装入无菌粪盒并进行预处理及粪便细菌总DNA提取与纯化。根据16S rRNA可变V3-V4区设计细菌特异性引物进行PCR扩增与纯化。将纯化好的样品按照每个样品100ng,每20个样品为一组进行混合,并建库,获得一定丰度的文库。用Miseq测序仪进行微生物多样性测序,根据扩增片段(V3-V4区)的长度选择2*300的测序模式。对测序实验结果进行评估,包括序列质量、数量、各样品覆盖深度、OTU聚类等基本信息进行评估。对结果进行统计计算,得到每个样品的菌群多样性和丰度指数,结合silva等数据库全面了解单个样品中所有微生物的进化关系和丰度差异。应用PCoA及非参数检验等统计方法,发现样品间潜在的分类趋势,找出阳虚质的特征功能菌群。结果：测序共获得的2,281,881条高质量的序列,通过多样性指数、PCoA.Metastat.非参数检验等统计分析,结果显示：1、与平和质相比,阳虚质的肠道菌群的丰度呈现出更加高低不均匀的特点；2、从群落结构上来看,阳虚质的肠道菌群结构与平和质对照组相比差异较小,主要表现在一些细菌类群的比例在两组人群中存在差异；3、通过统计学方法找出的两组间显著性差异的菌为：阳虚质中短波单胞菌属(Brevundimonas).明串珠菌属(Leuconostoc 、Turicibacter、Defluviitaleaceae_incertae_sedis、罗氏菌属(Rothia)、 Butyricimonas含量偏高；平和质中巨型球菌属(Megasphaera)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)、毛螺菌属(Lachnospira)的含量偏高。结论：本研究表明,阳虚质和平和质相比,其肠道菌群结构从总体上来说并没有太大的差异性,仅在部分肠道菌群结构上发生了一定程度的变化,通过统计分析,我们发现了两组之间存在显著性差异的细菌以及一些细菌类群比例的差异。本研究中所发现的阳虚质的特征菌群,将对研究阳虚质宿主和肠道菌群之间在代谢和免疫等方面的互相作用有一定意义。