【摘 要】
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目的:恶性肿瘤由于其病程发展迅速、易复发、预后不佳,开发更加有效的药物具有重要的意义。中医药历史悠久,作为天然药物的重要来源,微生物由于其生长迅速、易获得,源源不断地提供结构新颖,具有活性的先导化合物。因此,我们更加关注结合现代实验技术挖掘天然药物的抗肿瘤活性以及天然化学成分的开发。研究方法:本文第一部分以从白鲜皮分离得到的8-甲氧基芸香碱（8-methoxyflindersine,MOF）为研究
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目的:恶性肿瘤由于其病程发展迅速、易复发、预后不佳,开发更加有效的药物具有重要的意义。中医药历史悠久,作为天然药物的重要来源,微生物由于其生长迅速、易获得,源源不断地提供结构新颖,具有活性的先导化合物。因此,我们更加关注结合现代实验技术挖掘天然药物的抗肿瘤活性以及天然化学成分的开发。研究方法:本文第一部分以从白鲜皮分离得到的8-甲氧基芸香碱（8-methoxyflindersine,MOF）为研究对象,研究该药物对神经胶质瘤细胞U87和U251的迁移影响。1、采用CCK-8法研究细胞毒性作用。2、采用transwell和细胞划痕实验研究细胞迁移和侵袭作用。3、采用流式细胞术、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法研究细胞周期调控。4、采用蛋白免疫印迹法研究MAPK细胞通路的激活。本文第二部分以从白鲜皮分离得到的MOF和厚朴酚（magnolol,MGL）为研究对象,研究其对结肠癌细胞LOVO和RKO周期调控。1、采用CCK-8法研究细胞毒性。2、采用流式细胞术和DAPI染色法研究细胞凋亡。3、采用DCFH-DA探针法研究细胞内ROS水平。4、采用流式细胞术、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法研究细胞周期调控。5、采用蛋白免疫印迹法研究MAPK信号通路的激活。本文第三部分以雷公藤内生真菌Talaromyces amestolkiae CS-O-1为研究对象,采用大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、薄层制备、重结晶及半制备高效相色谱法对其次生代谢产物进行纯化,经理化性质和波谱数据分析鉴定化合物结构。采用比浊法研究次生代谢产物抗菌活性。结果:本文第一部分:1、MOF抑制神经胶质瘤细胞U87和U251增殖。2、MOF抑制神经胶质瘤细胞迁移与侵袭。3、MOF阻滞神经胶质瘤细胞G2/M期。4、MOF激活P38蛋白磷酸化。本文第二部分:1、200μM的MGL和MOF抑制结肠癌细胞增殖。2、MGL和MOF诱导结肠癌细胞凋亡。3、MGL和MOF提高结肠癌细胞内ROS水平。4、MGL和MOF阻滞结肠癌细胞LOVO的S期和RKO的G2/M期。5、MGL和MOF激活ERK蛋白磷酸化。本文第三部分从T.amestolkiae CS-O-1的发酵液中分离得到并鉴定5个化合物,包括penipyridone F（1）、penipyridone B（2）、aspergillumarin B（3）、3-benzylidene-2-methylhexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione（4）和chrodrimanin A（5）,从菌丝体中分离得到3个化合物,包括uridine（6）、adenosine（7）和bis（2-ethyloctyl）phthalate（8）。化合物1-8均未发现对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抗菌活性。结论:MOF激活MAPK信号通路P38蛋白磷酸化,阻滞神经胶质瘤细胞U87和U251的G2/M期从而抑制神经胶质瘤细胞的侵袭和迁移。MGL和MOF激活MAPK信号通路ERK蛋白磷酸化,诱导ROS介导的结肠癌细胞凋亡,阻滞结肠癌细胞LOVO的S期和RKO的G2/M期,最终抑制结肠癌细胞增殖。从雷公藤内生真菌T.amestolkiae CS-O-1的发酵液中分离得到5个化合物,从菌丝体中分离得到并鉴定出3个化合物,其中化合物1,2,4,8为首次从Talaromyces属真菌中分离得到,化合物1-8均未发现对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抗菌活性。
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