贻贝足丝蛋白在牙龈上皮细胞粘结中的应用研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:yhcguopdf
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目的随着科学技术的发展,越来越多的粘结相关材料被广泛应用于医学科学研究,并为临床科学研究作出许多重要贡献。然而,现有材料不仅在量或质方面无法满足日新月异的科学需求,且生物相容性差。因此,寻找一种行之有效、可大量生产、生物相容性好的粘结材料是目前亟需解决的问题。本研究根据贻贝能够超强粘附在各种物体表面的特性,选用贻贝足丝蛋白(Mussel Foot Protein, Mefp)及其粘附关键因子L-3,4-二羟基苯丙氨酸(L-Dioxyphenylalanine, L-DOPA)进行牙龈上皮细胞的粘附实验,同时对比几种牙龈上皮细胞原代培养的方法,通过观察细胞形态、绘制细胞生长曲线、测量细胞粘附量以及后续钙离子浓度的测定评价Mefp和L-DOPA对牙龈上皮细胞的粘结作用,旨在寻找一种利于牙龈上皮细胞原代及传代培养的方法,为临床进行牙龈上皮细胞的研究提供理论与技术支持。方法1.分别采用单纯Dispaes酶消化、单纯玻片覆盖组织块法以及Dispase酶消化联合玻片覆盖组织块法培养Beagle犬牙龈上皮细胞,通过观察细胞形态以及细胞生长时间,对比寻找最适细胞培养方法。2.培养皿表面分别经Mefp、L-DOPA、多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine,PLL)、蒸馏水处理后接种一定量细胞,通过二眯基苯基吲哚(4,6-Diamidino-2-Phenylindole,DAPI)染色计数计算细胞粘附量;酶标仪测量光密度值(Optical Density, OD),绘制细胞生长曲线;扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscopy, SEM)观察细胞形态;细胞内钙离子浓度测定分析细胞增殖能力。并与空白组的作用进行对比。结果1.单纯Dispase酶消化培养的牙龈上皮细胞贴壁少,培养成功率为0.0%。单纯玻片覆盖组织块法培养细胞贴壁多,但成纤维细胞污染严重,培养成功率仅为30.5%。Dispase酶消化联合玻片覆盖组织块法培养,短时间内可获得大量牙龈上皮细胞,且不存在成纤维细胞污染,成功率可达91.6%。卡方检验表明,各组细胞培养成功率有统计学意义(P<0.05)。2. Mefp处理组与空白组相比,镜下DAPI染色细胞多,细胞呈扁圆形,棘明显可见,48h细胞OD值高(P<0.05),呈典型S型生长,细胞内钙离子浓度也较空白组高(P<0.05);但与PLL处理组相比并无显著差异(P>0.05)。L-DOPA处理组与空白组相比,镜下DAPI染色细胞多,细胞呈扁圆形,伪足明显,48h细胞OD值高(P<0.05),呈典型S型生长,细胞内钙离子浓度也较高(P<0.05);而与Mefp处理组及PLL处理组相比,DAPI染色细胞及细胞内钙离子浓度亦显著增多(P<0.05)。结论1. Dispase酶消化联合玻片覆盖组织块法进行牙龈上皮细胞培养,可短时间获得大量牙龈上皮细胞,此法简单、有效。2. Mefp及L-DOPA可显著提高牙龈上皮细胞的粘附,其作用同PLL相似。
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