重组几丁质酶磁性固定化载体的构建与效果分析

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:libin101
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磁性纳米材料作为一种新型功能化高分子材料被广泛应用于生物技术各个领域,尤其是固定化各种酶类的研究更是成为当前酶学研究的热点问题等。几丁质酶能降解真菌细胞壁的几丁质成分,破坏真菌的细胞壁结构,使真菌丧失侵染能力和致病能力。本论文以Fe304为磁核,分别采用氨基、羧基、环氧基基团修饰磁球,最终形成磁性高分子微球载体,对重组几丁质酶进行固定化研究。研究结果如下:1、以FeCl3、FeCl2采用改进的化学共沉淀法生成Fe304的磁性微球。Fe304磁性微球粒径为30nm-80nm。2、以Fe304磁性微球为核,采用APTES制备了氨基化磁性载体(G1型)。磁球表面引入了氨基后粒径为50nm-100nm。3、以Fe304磁性微球为核,使用无水乙酸钠和柠檬酸钠溶于乙二醇中制备了羧基化磁性载体(G2型)。表面羧基化的磁性微粒为粒径均一的球形,直径约为200nm。4、以Fe304磁性微球为核,聚乙二醇(PEG)为分散介质,甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)为交联剂、偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,制备了环氧基化磁性载体(G3型),直径约为100nm。5、分别采用G1型、G2型、G3型功能化磁性载体固定化重组几丁质酶。结果表明,G1型载体加酶量100m1、反应时间5h为最佳;G2型载体加酶量80ml、反应时间7h为最佳;G3型固定化条件以加酶量120ml、反应时间9h为最佳。6、研究了G1型、G2型、G3型的固定效果及固定化酶的酶学性质。结果表明:G3型载体单位酶载量最高;低温冷藏5d后,G3型固定化酶剩余酶活力为89.4%;重复利用5次后,剩余酶活力仍然保持在66%以上;固定化酶较游离酶有更好的热稳定性;固定化酶的最适pH在6-8。
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