【摘 要】
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背景:肝癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一,也是癌症相关死亡的第三大原因。其中,肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是最常见的病理亚型,占据肝脏恶性肿瘤的三分之二以上。由于肝癌起病较隐匿,同时缺乏及时、准确的诊断依据,导致肝癌患者的生存率普遍较差。近年来,越来越多的研究表明,长链非编码RNA在多种恶性肿瘤的进展过程中发挥重要作用,如表观遗传修饰、增殖、凋亡、纤维化、血
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背景:肝癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一,也是癌症相关死亡的第三大原因。其中,肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是最常见的病理亚型,占据肝脏恶性肿瘤的三分之二以上。由于肝癌起病较隐匿,同时缺乏及时、准确的诊断依据,导致肝癌患者的生存率普遍较差。近年来,越来越多的研究表明,长链非编码RNA在多种恶性肿瘤的进展过程中发挥重要作用,如表观遗传修饰、增殖、凋亡、纤维化、血管生成、免疫反应和转移。因此,在肝癌中筛选出特异性表达的lnc RNAs,并且探究其在肝癌恶性生物学行为中的分子机制对提高肝癌患者的预后十分重要。目的:本课题研究基于公共数据库TCGA（The Cancer Genome Atlas,TCGA）和GEPIA2（Gene Expression Profiling Interactive Analysis2,GEPIA2）,分析长链非编码RNA LINC01419在肝癌组织中表达情况。同时,在体外通过细胞实验探索LINC01419作为ce RNA（Competing endogenous RNA,ce RNA）在肝癌增殖、迁移和侵袭中发挥的作用和潜在的调控机制。方法:1、下载TCGA肝癌微矩阵列数据,分析肝癌组织中差异表达的Lnc RNAs;GEPIA2数据库中下载LINC01419在肝癌组织及正常肝组织中的表达情况。2、提取正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞SMMC-7721、HCC-LM3、Huh-7、Hep3B的总RNA,通过q RT-RCR检测LINC01419的表达量。3、构建LINC01419的过表达质粒和小分子干扰片段siRNA,并分别转染肝癌细胞株SMMC-7721和HCC-LM3,q RT-RCR分析LINC01419在SMMC-7721和HCC-LM3中的表达情况。4、在SMMC-7721和HCC-LM3中转染siRNA和过表达质粒LINC01419后,采用cck-8实验、细胞划痕实验和transwell实验评估LINC01419对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。5、利用数据库lnc RNASNP2和Lnc Base预测LINC01419下游潜在靶点miR-503-5p,双荧光素酶报告实验进行验证。6、下调SMMC-7721和HCC-LM3中LINC01419的表达,q RT-PCR检测miR-503-5p的表达。共转染si-LINC01419和miR-503-5p inhibitor后,通过cck-8、transwell等一系列功能试验探索LINC01419如何通过miR-503-5p影响肝癌细胞的增殖和迁移;并通过Wb实验检测EMT相关蛋白E-cad、N-cad和Vimentin的表达情况。结果:1、TCGA和GEPIA2数据库中分析显示,LINC01419在肝癌组织表达水平显著上调（p＜0.001）。2、敲低肝癌细胞株SMMC-7721和HCC-LM3中LINC01419的表达能够显著抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(（p＜0.05）。相反,LINC01419的上调导致了肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的增强（p＜0.05）。3、双荧光素酶基因报告实验表明LINC01419与miR-503-5p直接结合（p＜0.05）。4、LINC01419可通过调控miR-503-5p的表达促进肝癌细胞的增殖和迁移（p＜0.01）,并通过下调E-cad的表达,同时上调N-cad、Vimentin的表达,进而促进肝癌细胞EMT的过程。结论:1、LINC01419在肝癌组织和肝癌细胞株中的表达量均较高。2、LINC01419可以促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。3、LINC01419通过竞争性结合miR-503-5p,抑制miR-503-5p的表达,从而促进肝癌细胞的发生发展。
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