【摘 要】
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本试验建立金黄色葡萄球菌和LPS诱导的小鼠乳腺炎模型,分别讨论蒲公英提取物对金黄色葡萄球菌和LPS诱导的小鼠乳腺炎保护作用及机制研究。本试验分为空白组、模型组、阳性组(D
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本试验建立金黄色葡萄球菌和LPS诱导的小鼠乳腺炎模型,分别讨论蒲公英提取物对金黄色葡萄球菌和LPS诱导的小鼠乳腺炎保护作用及机制研究。本试验分为空白组、模型组、阳性组(DEX5 mg/kg)和蒲公英提取物高、中、低剂量组(10 g/kg、5 g/kg、2.5 g/kg)。蒲公英提取物高、中、低剂量组分别连续灌胃6d,2次/d,空白组灌胃等体积生理盐水。于乳房基部分别灌注100μL1.0×106 CFU金黄色葡萄球菌悬液和50μL0.2 mg/mL LPS悬液,分别建立金黄色葡萄球菌和LPS诱导的小鼠乳腺炎模型,阳性组在建模前1h和建模后12h腹腔注射DEX。末次激发24 h后,分离血清,剥离乳腺。ELISA法测定小鼠血清及乳腺中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,MPO试剂盒测定乳腺中MPO的含量,HE染色观察小鼠乳腺组织病理变化特点,免疫组化法分析MPO的分布与活性,Western blot法测定TLR2和TLR4蛋白的表达以及NF-κB信号通路和MAPKs信号通路相关蛋白的表达。 结果显示:与模型组比较,蒲公英提取物能显著或极显著抑制金黄色葡萄球菌诱导的小鼠血清和组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌(P<0.01或P<0.05);抑制金黄色葡萄球菌刺激的小鼠乳腺细胞发生变形、坏死,减轻乳腺上皮细胞大量脱落和炎性细胞浸润程度;蒲公英提取物能显著或极显著上调金黄色葡萄球菌刺激的IκBα蛋白的表达(P<0.01或P<0.05),下调TLR2、p-IκBα、p-p65、p-p38、p-JNK、p-ERK蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。 与模型组比较,蒲公英提取物能显著或极显著抑制LPS诱导的小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌(P<0.01或P<0.05);抑制LPS刺激的小鼠乳腺腺泡壁出现增厚、水肿和充血的程度,减少嗜中性粒细胞分泌;蒲公英提取物能显著或极显著降低LPS刺激的小鼠血清中MPO的含量,减少MPO在乳腺中的分布与活性(P<0.01或P<0.05);蒲公英提取物能显著或极显著上调LPS刺激的IκBα、NF-κB p65蛋白的表达(P<0.01或.P<0.05),下调TLR4、p-IκBα、p-p65、p-p38、p-JNK、p-ERK蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。 综上研究表明,蒲公英提取物能显著或极显著抑制小鼠血清及组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌,减轻乳腺上皮细胞大量脱落和炎性细胞浸润程度,减少嗜中性粒细胞的分泌,降低小鼠血清中MPO的含量及在乳腺中的分布与活性,下调TLR2和TLR4蛋白的表达且调控NF-κB和MAPKs信号通路相关蛋白的表达,从而对金黄色葡萄球菌和LPS诱导的乳腺炎起到保护作用,为研究蒲公英提取物的临床开发及应用奠定基础。
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