逆基因NANOGP8的表达与人胃癌SGC-7901细胞生物学特性相关

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目的:构建pEGEP-N1-NANOGP8真核表达载体及针对人NANOGP8基因的干扰质粒pshRNA-NANOGP8;探讨重组质粒pEGFP-N1-NANOGP8及pshRNA-NANOGP8对人胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡、周期、迁移、侵袭的影响,为更深入研究逆基因NANOGP8在胃癌发生发展中的具体作用机制奠定基础。方法:(1)从人卵巢癌细胞SKOV-3中提取总RNA,通过RT-PCR获得NANOGP8基因,将其克隆到pEGFP-N1质粒上,构建pEGFP-NI-NANOGP8真核表达载体,将构建好的重组质粒进行双酶切及测序鉴定;(2)构建针对人NANOGP8基因的干扰质粒pshRNA-NANOGP8及阴性对照质粒pshRNA-negative,将构建好的两个重组质粒进行酶切、测序鉴定;(3)将测序正确的重组质粒在脂质体2000的介导下转染入人胃癌SGC-7901细胞,通过荧光显微镜、逆转录PCR及Western blot法检测其表达情况;通过CCK-8方法检测SGC-7901胃癌细胞增殖情况;利用流式细胞仪分析胃癌细胞周期变化及凋亡情况;TranswellTM实验验证SGC-7901细胞迁移以及侵袭能力的改变情况。结果:(1)通过RT-PCR成功获得NANOGP8基因片段,经酶切、测序验证成功构建出PEGEP-N1-NANOGP8重组质粒; (2)经酶切、测序验证成功构建出pshRNA-NANOGP8及pshRNA-negative重组质粒;(3)重组质粒转染48小时后的胃癌SGC-7901细胞能够通过荧光显微镜观察到荧光蛋白的表达;逆转录PCR及Western blot结果显示PEGEP-N1-NANOGP8转染组高表达NANOGP8,并能检测到NANOGP8-GFP融合蛋白的表达,而pshRNA-NANOGP8转染组NANOGP8低表达;NANOGP8高表达组能促进肿瘤细胞增殖,促使细胞进入S期,迁移侵袭能力明显增强。而低表达组细胞增殖受到明显抑制,细胞大量停留在G0/G1期,细胞的侵袭、迁移能力也同样受到抑制。结论:逆基因NANOGP8的转录表达,与胃癌的增殖、细胞周期、凋亡、迁移、侵袭有密切的关系。
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