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目的:本研究以巨噬细胞为靶细胞,探讨了感染依赖性抗原Tp0768的促炎机制,并筛选出Tp0768可能的炎症信号转导通路,为进一步揭示梅毒螺旋体的致病机制奠定基础。方法:1.用Tp0768刺激THP-1分化的巨噬细胞和Raw264.7细胞后,RT-qPCR检测IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA的表达水平。2.Tp0768刺激细胞后,使用透射电子显微镜观察内质网结构变化。WesternBlot检测ER应激相关标志物PERK、Bip和IRE1α的表达水平。ER应激抑制剂4-PBA预处理细胞后RT-qPCR检测IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA的水平。3.Tp0768刺激细胞后,使用流式细胞术和细胞免疫荧光分别检测了THP-1分化的巨噬细胞和Raw264.7细胞中的ROS水平。细胞免疫荧光和WesternBlot检测了NF-κBp65的核转位和蛋白表达水平。NF-κB的抑制剂预处理细胞后,RT-qPCR检测IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA的表达水平。4.通过CCK8检测了PERK抑制剂GSK2656157的IC50。GSK2656157预处理细胞后,Western Blot检测PERK、NF-κB(P65)、JNK和P-JNK的蛋白水平。RT-qPCR检测经GSK2656157或SP600125预处理细胞后IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA的表达水平。5.通过CCK8检测了IRE1α抑制剂STF-083010的IC50。STF-083010预处理细胞后,琼脂糖凝胶电泳检测XBP1的剪接,Western Blot检测IRE1α、JNK和P-JNK的蛋白水平。RT-qPCR检测经STF-083010或SP600125预处理细胞后IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA的表达水平。结果:1.Tp0768刺激巨噬细胞可导致IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA的表达水平以剂量和时间依赖性方式增加。2.Tp0768刺激细胞后内质网扩张、肿胀以及正常折叠结构消失。PERK、Bip和IRE1α的蛋白表达水平上调。ER应激抑制剂4-PBA预处理细胞后能够显著降低Tp0768诱导的IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA水平(P<0.05)。3.Tp0768刺激后可显着诱导细胞内ROS产生,使用4-PBA干预后可显著降低Tp0768诱导的细胞内ROS的水平(P<0.05)。NF-κBp65的蛋白质水平以剂量依赖性上调并发生核转位。抑制NF-κB途径可降低TP0768诱导的IL-1β、IL-6和IL-8的表达(P<0.05)。4.THP-1分化的巨噬细胞和Raw264.7细胞中GSK2656157的IC50分别为12.56μM和13.87μM。PERK途径被抑制可以显著抑制NF-κB(P65)和JNK通路。SP600125预处理后减弱了TP0768诱导的IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA的表达(P<0.05)。5.THP-1分化的巨噬细胞的IC50为24.72μM,Raw264.7细胞的IC50为13.89μM。20μM STF-083010干预可显著抑制TP0768诱导的XBP1 mRNA的剪接和XBP1s的产生。IRE1α信号传导的抑制降低磷酸化JNK水平。使用SP600125抑制JNK激酶活性,IL-1β、IL-6和IL-8的转录被显着抑制(P<0.05)。结论:1.重组梅毒螺旋体蛋白Tp0768通过ER应激和ROS/NF-κB途径促进THP-1分化的巨噬细胞和Raw264.7细胞诱导促炎细胞因子IL-1β、IL-6和IL-8的产生。2.ER应激参与Tp0768诱导的促炎细胞因子的表达经由PERK途径和IRE1α/XBP1途径诱导,其中还涉及到下游通路NF-κB和JNK通路的激活。