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目的:胰腺癌是一种高致死率的疾病,恶性程度高,早期诊断困难,手术切除率低,对放化疗不敏感,容易复发和远处转移,预后极差。IKBKE属于IκB激酶家族中非经典IκB激酶的一种,也属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其主要通过调节干扰素和NF-κB信号通路在人体先天免疫中起着重要的调节作用。同时也发现IKBKE在多种恶性肿瘤中作为致癌基因参与肿瘤的发生发展及恶性转化等过程。本课题主要研究IKBKE和NF-κB在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌临床病理特征、预后的关系,并研究通过sh-RNA慢病毒敲低IKBKE对胰腺癌的生物学行为的影响,为胰腺癌分子靶向治疗提供新的治疗策略及潜在的新靶点。方法:收集胰腺癌61例和正常胰腺标本13例,用免疫组织化学法检测胰腺癌及正常胰腺组织中IKBKE和NF-κB的表达情况,并分析两者表达情况与临床病理特征、预后的关系及两者的相关性。选用两种胰腺癌细胞系KRAS野生型Bxpc-3和KRAS突变型Capan-1,先应用RT-PCR和Western blot检测两种细胞系中IKBKE的表达并作比较。再通过IKBKE-shRNA慢病毒敲低IKBKE的表达,采用RT-PCR和Western blot检测验证IKBKE的表达情况;同时应用细胞免疫荧光染色方法观察两种胰腺癌细胞系敲低前后的IKBKE表达情况;并应用平板克隆实验、CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测细胞的克隆增殖能力、增殖、迁移、侵袭能力,以分析IKBKE对胰腺癌生物学行为的影响。结果:正常胰腺组织中,13(100%)例均为IKBKE低表达,胰腺癌组织中,32(52.5%)例为IKBKE高表达,29(47.5%)例为IKBKE低表达,胰腺癌组织IKBKE的表达水平明显高于正常胰腺组织,差异有统计学意义(P<0.001)。正常胰腺组织中,13(100%)例均为NF-κB低表达;胰腺癌组织中,43(70.5%)例为NF-κB高表达,18(29.5%)例为NF-κB低表达,胰腺癌组织NF-κB的表达水平同样明显高于正常胰腺组织,差异有统计学意义(P<0.001)。Spearman等级相关检验显示IKBKE和NF-κB在胰腺癌的表达呈正相关(r=0.553,P<0.001)。胰腺癌中IKBKE的表达情况和胰腺癌的分化程度(χ~2=9.335,P<0.001)明显相关。生存分析显示IKBKE高表达患者的总生存期低于低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot结果均显示两种胰腺癌细胞系KRAS野生型Bxpc-3和KRAS突变型Capan-1中IKBKE有着较高的表达水平,且在KRAS突变型Capan-1中IKBKE的表达水平比KRAS野生型Bxpc-3更高。慢病毒成功感染细胞并建立稳定的细胞系,用RT-PCR和Western blot证明IKBKE-shRNA慢病毒可有效的敲低两种胰腺癌细胞系Bxpc-3和Capan-1中IKBKE在mRNA和蛋白水平的表达,较空白对照组和阴性对照组相比,Bxpc-3和Capan-1的IKBKE敲低组的IKBKE的表达水平均明显降低。细胞免疫荧光染色结果显示Bxpc-3和Capan-1的IKBKE敲低组的荧光染色强度较阴性对照组明显降低。平板克隆实验显示Bxpc-3和Capan-1的IKBKE敲低组的克隆形成数较空白对照组和阴性对照组明显减少(P<0.001)。CCK-8实验证实Bxpc-3和Capan-1的IKBKE敲低组较空白对照组和阴性对照组的增殖能力明显受到抑制(P<0.001)。细胞划痕实验和Transwell侵袭实验证实Bxpc-3和Capan-1的IKBKE敲低组较空白对照组和阴性对照组的迁移、侵袭能力明显受到抑制(P<0.001)。结论:IKBKE和NF-κB在胰腺癌中的表达水平呈上调,两者表达强度具有正相关性。IKBKE的表达与胰腺癌的分化程度明显负相关,也是影响患者总生存期的因素,IKBKE和NF-κB可能参与了胰腺癌的发生发展。KRAS突变可能进一步激活IKBKE的表达,且IKBKE作为胰腺癌重要的致癌基因促进肿瘤的进展。IKBKE在促进胰腺癌的增殖、迁移侵袭能力方面发挥重要的作用,以促进胰腺癌的恶变和转移,敲低IKBKE可有效降低胰腺癌增殖迁移侵袭能力等生物学行为,并可为胰腺癌的靶向治疗提供新的治疗方向。