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目的：补益中药可通过促进机体某些免疫细胞的生长和细胞因子的分泌而达到提高免疫力、抗肿瘤的作用。但提高免疫力的同时是否有促进肿瘤细胞生长的作用？是否应用的越多越好？未见系统报道。本课题诣在通过体内和体外实验及流式细胞检测观察补益中药是否具有促进肿瘤细胞和小鼠肿瘤组织生长的作用，并探讨用药时机，为临床用药提供一定的参考依据。材料和方法：1.体外细胞培养：在呈对数生长期的人食管癌细胞株TE-13中分别加入不同浓度的补益中药（黄芪注射液和参芪注射液），在37OC、5%CO2、饱和湿度的培养箱内培养，于第3天更换一次培养液和相应浓度的中药，培养6天后消化、离心、台盼蓝染色，在光学显微镜下计数细胞，每瓶计数3次，每组3瓶。以观察比较不同浓度的补益中药对人食管癌细胞株TE-13的作用。2.动物实验： 本实验采用近交系T739小鼠，雌雄各半，体重在18-22克。LA795可移植性鼠肺腺癌瘤株（小鼠及瘤株均引自北京中国医学科学院肿瘤医院动物中心）。将购买的带瘤小鼠断颈处死，取新鲜的肿瘤组织剪碎，加入3～3.5ml/g瘤重的生理盐水，过匀浆器和100目不锈钢网，制成3×107/ml的单细胞悬液，在每只小鼠左后肢趾间注射0.1ml肿瘤细胞悬液，细胞数约为3×106/只。制成不同肿瘤负荷大小的小鼠模型，即荷瘤1组：瘤细胞种植后<WP=4>每天观察，只要肉眼看到肿瘤结节便开始用药（约在注射后1周）。该组实验主要为观察小鼠体内瘤负荷较小时补益药物的作用情况。荷瘤2组：肿瘤细胞种植后待其肿瘤的几何平均直径增长至5.0±0.2mm时开始用药（约在注射后2周时）。分别随机分组，黄芪组每日腹腔注射黄芪注射液0.2ml，参芪组每日腹腔注射参芪注射液0.2ml，对照组小鼠每日给予腹腔注射生理盐水0.2ml，各组均用药30天。每日用电子称测量小鼠体重，电子卡尺测量小鼠肿瘤的三径，并计算几何平均直径，观察与对照组相比补益药物对不同肿瘤负荷小鼠体重、瘤径、生存期的影响。制备与荷瘤２组小鼠相同肿瘤负荷相同的小鼠，并随机分组后观察腹腔注射补益中药与放疗同时应用对小鼠体重、瘤径、生存期的影响（观察方法同上）。3.流式细胞检测：制备与荷瘤2组小鼠肿瘤负荷相同的小鼠，腹腔注射补益中药黄芪或参芪7天后将小鼠处死，取其肿瘤组织边缘部分（避免坏死组织），在70%的酒精中固定后送流式细胞技术检测，以观察补益中药作用后小鼠肿瘤组织的肿瘤细胞凋亡指数、肿瘤细胞增殖指数和血管内皮生长因子的表达量。结果：1 体外细胞培养：1.1 TE-13人食管癌细胞加入不同浓度的黄芪注射液培养6天后计数，四组结果分别是对照组（1.96±1.05）×106个、黄芪1组（1.95±2.35）×106个、黄芪2组（2.98±1.63）×106个、黄芪3组（2.83±1.47）×106个。黄芪含量为3.45%的黄芪2组和黄芪含量为1.7%的黄芪3组的细胞增长速度明显快于对照组，且具有统计学意义，P＜0.05。而黄芪浓度为6.9%的黄芪<WP=5>1组与对照组相比较却无明显差异。1.2 TE-13人食管癌细胞加入不同浓度参芪注射液培养6天后计数结果，对照组（2.71±1.07）×106个、参芪1组（5.00±1.64）×106个、参芪2组（3.33±1.86）×106个、参芪3组（3.24±4.05）×106个。参芪1组（25%）细胞增长明显快于对照组。P＜0.05，具有统计学意义。参芪2组（3.12%）和参芪3组（0.39%）的药物浓度无明显的促进该肿瘤细胞生长作用。2 动物实验：2.1荷瘤1组小鼠（小鼠体内肿瘤负荷较小时），本实验观察到腹腔注射黄芪组小鼠的平均体重减轻程度较注射生理盐水的对照组小鼠明显，两组小鼠体重和肿瘤体积变化均无统计学意义，P＞0.05。对照组小鼠的中位生存时间为30±2.14天，黄芪组小鼠的中位生存时间为25±2.06天，无统计学意义，P＞0.05。2.2荷瘤2组小鼠（体内具有一定的肿瘤负荷时）腹腔注射黄芪注射液的小鼠体重、肿瘤体积与对照组相比都无明显差异，腹腔注射参芪注射液的小鼠体重减轻（2.94±1.10）g，与对照组（1.19±1.22）g相比具有统计学意义，P＜0.05。三组小鼠相比较中位生存期分别为对照组22±1.20天，黄芪组23±0.77天，参芪组22.5±1.08天，无明显差异，P＞0.05。2.3中药加放疗组（对荷瘤小鼠的肿瘤组织给予肿瘤局部8Gy的60CO照射后，并联合给予补益中药黄芪注射液腹腔注射的小鼠）实验观察结果，注射黄芪组小鼠体重减轻较对照组明显，但P＞0.05。该组小鼠肿瘤组织的体积增长明显快于对照组，分别为黄芪组1181.06 ±36.54mm3，对照组490±27.62 mm3具有统计学意义，P＜0.05。黄芪组小鼠的中位生存期为12±3.21天，<WP=6>与对照组17.5±3.96天相比较无统计学意义，P＞0.05,但有缩短的趋势。3 流式细胞结果 3.1经单因素方差分析黄芪组和参芪组小鼠肿瘤组织的细胞凋亡指数百分率测定均明显高于对照组的小鼠的测定结果，其中对照组与黄芪组之间比较P=0.001，与参芪组比较P=0.001，有极显著性差异。3.2对照组与黄芪组和参芪组的细胞增殖指数相比较没有统计学意义，P＞0.05。3.3与实验组相比较，黄芪组和参芪组小鼠肿瘤组织的血管内皮生长因子的表达均较低，且具有统计学意义，P＜0.05。小结：1.补益中药黄芪注射液对照射后小鼠LA795肺腺癌肿瘤组?