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目的：1、检测结直肠正常组织、腺瘤、结直肠癌旁组织、结直肠癌组织Kiss-1基因启动子甲基化阳性率，分析其在结直肠癌的发生、发展中的作用。2、检测结直肠癌组织中Kiss-1基因表达量的差异，分析其与结直肠癌临床病理特性的关系。3、检测结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化水平，分析其与结直肠癌临床病理特性的关系及其临床意义。方法：1、采用甲基化特异性聚合酶链反应法（MSP）检测结直肠癌组织、癌旁组织、结直肠腺瘤、正常结直肠组织中Kiss-1基因启动子区CpG岛甲基化状态。2、应用实时荧光定量PCR法（realtime-PCR）检测结直肠癌组织中肿瘤转移抑制基因Kiss-1基因mRNA表达水平。3、应用蛋白质印迹法（wersten-blot）检测结直肠癌组织中Kiss-1基因蛋白表达水平。结果：1、结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化阳性率为82.2%(60/73)，癌旁组织30.0%(22/73)，结直肠腺瘤组织21.7%(5/23)，正常结直肠组织6.3%(9/142)，四者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。2、结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化阳性率低分化组高于高分化组(90.5%VS60%)，T3+T4组高于T1+T2组(98.1%VS35.0%)，淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(93.3%VS74.4%)，远处转移组高于无远处转移组(100%VS87.3%)，差异有统计学意义(P<0.05)；结直肠癌组织Kiss-1基因甲基化水平与性别、年龄、肿瘤部位及瘤体大小无关(P>0.05)。3、测定结直肠癌组织中Kiss-1基因mRNA的表达量，Kiss-1基因启动子甲基化阳性组低于阴性组(0.240±0.036VS1.138±0.136，P<0.05)；结直肠癌组织Kiss-1基因mRNA表达量差异与肿瘤分化、浸润深度、淋巴结转移及远处转移有关(P<0.05)。结直肠癌组织Kiss-1基因mRNA相对表达量与性别、年龄、肿瘤部位及瘤体大小无关(P>0.05)。4、测定结直肠癌组织中Kiss-1基因蛋白质表达量，Kiss-1基因启动子甲基化阳性组（0.388±0.032）显著低于甲基化阴性组（0.945±0.050）（P<0.05）。结直肠癌组织中Kiss-1基因蛋白质表达差异与浸润深度、淋巴结转移及远处转移有关(P<0.05)。同样，Kiss-1基因目的蛋白表达量与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化及部位无关（P>0.05）。结论：1、Kiss-1基因启动子甲基化是结直肠癌常见的表观遗传学修饰方式之一，可能与结直肠癌的转移、浸润和分化等特性密切相关；2、结直肠癌组织中Kiss-1基因表达水平可能受到Kiss-1基因启动子甲基化水平的调控；3、Kiss-1基因甲基化水平有可能成为评估结直肠癌转移风险及预后的指标之一。目的：1、分析不同人结直肠癌细胞株中Kiss-1基因启动子甲基化状态与Kiss-1基因mRNA、表达蛋白metastin水平之间的关系，研究Kiss-1基因甲基化对结直肠癌细胞侵袭、迁移能力的影响。2、研究5-杂氮-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对结直肠癌细胞HCT116的Kiss-1基因启动子甲基化以及Kiss-1基因表达的影响。3、研究5-Aza-CdR作用结直肠癌细胞HCT116的侵袭、转移等生物学特性的影响，探讨是否能够通过逆转Kiss-1基因启动子甲基化的方式改变结直肠癌的生物学特性。方法：1、分别应用甲基化特异性PCR（MSP）、实时定量PCR法（Realtime-PCR）和免疫印迹法（Western-blot）检测人结直肠癌细胞HCT116、SW480、SW1116、VOLO中Kiss-1基因启动子甲基化状态、Kiss-1基因mRNA表达水平和metastin表达水平；Transwell小室检测人结直肠癌细胞侵袭和迁移能力。2、应用不同浓度（0、0.1、1、5、10umol/L）的5-Aza-CdR作用HCT116细胞，分别于24小时、3天和5天后检测Kiss-1基因启动子甲基化水平、Kiss-1基因mRNA和metastin的表达变化情况；3、应用Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测细胞增殖能力、Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结果：1、HCT116、SW116及SW480细胞中Kiss-1基因启动子甲基化阳性，LoVo细胞甲基化阴性；定量分析Kiss-1基因mRNA和metastin表达量，结果显示LoVo>SW480>SW1116>HCT116（p<0.05）。SW480、VoLo细胞的增殖能力低于HCT116组（p<0.05），SW1116、SW480、VoLo细胞侵袭能力均低于HCT116组（p<0.05），SW480、VoLo细胞迁移能力均低于HCT116组（p<0.05）。2、各剂量组在5-Aza-CdR干预HCT116细胞24h、3天及5天后，均呈现Kiss-1基因mRNA表达量较对照组明显增加（p<0.05），并呈时间依赖性。5-Aza-CdR干预HCT116细胞24h后，5umol/L和10umol/L组Kiss-1基因mRNA表达量较对照组有明显增高（P<0.05）；3天后，除0.1umol/L组外，各组均有较对照组有明显增高（P<0.05）；5天后，各个浓度处理组Kiss-1基因mRNA表达量均较对照组有明显增高（P<0.05），但10umol/L组与5umol/L组相比较无明显增加（P>0.05）。3、不同剂量5-Aza-CdR干预HCT116细胞5天后，各浓度组metastin表达量较对照组有明显增高（P<0.05），但10umol/L组与5umol/L组无明显差异（P>0.05）。5umol/L浓度5-Aza-CdR干预HCT116细胞，与对照组相比较，24h、3天和5天Kiss-1基因metastin表达量明显升高，且随着时间的延长，表达量逐渐升高（P<0.05），呈时间依赖性。4、各剂量组与对照组比较，24h、3天中10umol/L组对HCT116细胞增殖能力具有明显抑制作用（P<0.05）；5天中各浓度组对HCT116细胞增殖能力均有明显抑制作用，随着剂量的增加的延长，其抑制率增加（P<0.05），且呈浓度依赖性。5、同一剂量组5-Aza-CdR干预HCT116细胞24h、3天、5天后， HCT16细胞的侵袭能力均较对照组明显下降（P<0.05），且呈时间依赖性。5-Aza-CdR干预HCT116细胞24小时后，10umol/L组细胞侵袭能力较对照组明显下降（P<0.05）；干预3天和5天后，4个剂量组细胞的侵袭能力均较对照组均明显下降（P<0.05），且呈浓度依赖性。6、同一剂量组5-Aza-CdR干预HCT116细胞24h、3天、5天后，各剂量组细胞迁移能力较对照组均有明显下降（P<0.05），且呈时间依赖性。5-Aza-CdR干预HCT116细胞24小时后，10umol/L组细胞迁移能力较对照组明显下降（P<0.05）；干预3天和5天后，4个剂量组细胞的迁移能力均较对照组均明显下降（P<0.05），且呈浓度依赖性。论：1、Kiss-1基因启动子区异常甲基化可能是结直肠癌细胞中Kiss-1基因表达下调的原因之一，且与结直肠癌细胞的侵袭、迁移能力有关。2、针对Kiss-1基因启动子高甲基化的结直肠癌HCT116细胞株，5-Aza-CdR能够逆转Kiss-1基因启动子异常甲基化修饰的作用，并上调Kiss-1基因的表达，并能够降低结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。